Образец диагностическая карта: Диагностическая карта техосмотра на машину | как выглядит | что указано в документе | какие должны стоять штампы и печати

Содержание

Применение диагностической карты о прохождении технического осмотра в качестве альтернативы международному сертификату технического осмотра

В связи с внесением изменений в Федеральный закон от 1 июля 2011 г. № 170-ФЗ «О техническом осмотре транспортных средств и о внесении изменений в отдельные законодательные акты Российской Федерации» (в редакции Федерального закона от 28 июля 2012 г. № 130-ФЗ), утверждением новой формы диагностической карты технического осмотра (постановление Правительства Российской Федерации от 29 ноября 2012 г.  №  1236), а также в соответствии с пунктом 4 Добавления 2 к Соглашению о принятии единообразных условий для периодических технических осмотров колесных транспортных средств и о взаимном признании таких осмотров (совершено в Вене 13 ноября 1997 года) по инициативе АСМАП Минтрансом России был направлен в МИД России образец новой формы диагностической карты технического осмотра, которая будет применяться российскими международными перевозчиками в качестве альтернативы  международному  сертификату технического осмотра (МСТО) наряду с талоном о прохождении государственного технического осмотра, направленным ранее, и диагностической картой старого образца.

 

На основании данного обращения МИД России через Постоянное Представительство Российской Федерации при ООН 26 декабря 2012 года препроводил Генеральному Секретарю ООН образец новой формы диагностической карты технического осмотра. В дальнейшем образец новой формы диагностической карты был направлен Постоянным представительством Российской Федерации при отделении ООН и других международных организаций в Женеве Исполнительному Секретарю Европейской Экономической комиссии ООН.

 

В настоящее время образец новой формы диагностической карты размещен на сайте ЕЭК ООН – документ от 04.03.2013 ECE/TRANS/WP.29/1074/Rev.4 (http://www.unece.org/fileadmin/DAM/trans/doc/2013/wp29other/1997agr/Ruspti-03.pdf), а  также направлен Секретариатом ЕЭК ООН письмом от 19 февраля т.г. странам-участницам Венского Соглашения 1997 года.

 

Таким образом, российскими автомобильными перевозчиками в качестве альтернативы МСТО наряду с диагностической картой нового образца могут применяться до окончания указанного в них срока действия – талон государственного технического осмотра (старого образца), талон технического осмотра (нового образца) и диагностическая карта старого образца.

 

АСМАП

Диагностическая карта и техосмотр онлайн: получить за 10 мин

Самостоятельно заполните данные по Вашему транспортному средству в ниже представленной форме.

Данные о владельце ТС

Тип*

Физ. лицоЮр. лицо

Выберите тип владельца ТС

Данные о регистрации ТС

Документ*

Тип документаСРТСПТС

Выбираем Тип предоставляемого документа (СРТС или ПТС) Категория*

КатегорияА | L — Мототранспортные средстваB | M1 — Легковые автомобилиB | N1 — Грузовые автомобили до 3.5 тоннC | N2 — Грузовые автомобили 3.5 — 12 тоннC | N3 — Грузовые автомобили свыше 12 тоннD | M2 — Автобусы до 5 тоннD | M3 — Автобусы свыше 5 тоннE | O1 — Прицепы до 0.75 тоннE | O2 — Прицепы 0.75 — 3.5 тоннE | O3 — Прицепы 3.5 — 12 тоннE | O4 — Прицепы свыше 12 тонн

Выбираем категорию ТС, на который оформляем ДК

Идентификаторы*

Для упрощения процедуры можно указать один из трех идентификаторов

Хотя бы одно из трех полей должно быть заполнено

Данные о транспортном средстве

Топливо*

Тип топливаБензинДизельСжатый газСжиженный газ

Выбираем Тип топлива

Тормозная система*

Тип тормозной системыГидравлическаяПневматическаяМеханическаяКомбинированная

Выбираем Тормозную систему(на всех ТС, кроме Грузовиков, Автобусов и Прицепов тип ставим Гидравлический)

Шины*

Модель шинAcceleraAchillesAeolusAmericaAmtelAmtel-VredesteinApolloAtturoAuroraAustoneAustyreAvonAvsTyreBarumBFGoodrichBridgestoneCEATChengshanContinentalContyreCooperCordiantDaewooDaytonDeanDebicaDeestoneDiplomatDunlopEffiplusEurotecEuzkadiFalkenFateFederalFenixFirenzaFirestoneFirststopFlamingoFormulaFortunaForwardFuldaFullWayFuzionGeneralGislavedGoodrideGoodyearGTHankookHerculesHIFLYInfinityInsa-TurboInterstateIronmanKamaKellyKelly TiresKendaKenexKingstarKirovKleberKormoranKumhoLassaLingLongMaborMaloyaMarangoniMarshalMastercraftMatadorMatador-ОмскшинаMaxtrekMaxxisMedvedMetzelerMichelinMickey ThompsonMilestoneMillenniumMinervaMitasMotomasterMRFNankangNeutonNexenNexen RoadianNexen RoadstoneNittoNokianNordmanNovexOHTSUOrnetPirelliPneumantPointSPREMIORRIPresidentRapidRegalRemingtonRikenRockstoneRosavaRotexSagitarSailunSatoyaSavaSemperitShinkoSIBURSportivaStarFireStarperformerStunnerSumitomoSumoSunnyTigarToyoTracmaxTrayalTri AceTriangleTungaTyrexUniroyalValsaViattiVikingVoltyreVredesteinVSPWanliWestlakeYokohamaZeetexАШКБарнаулБелшинаВоронежДніпрошинаКendaКрасноярскКШЗМШЗНИИШПОмскшинаПетрошинаУралшинаЯШЗ

Указываем Марку резины на Вашем ТС (английскими буквами)

Особые отметки

Особые отметкиИсп. для учебной ездыИсп. в качестве таксиИсп. для маршрутных перевозокУстановлено газобалонное оборудование (пропан — сжиженный газ)Установлено газобалонное оборудование (метан — сжатый газ)

В особых отметках выбираем соответсвующее значение, если ничего не подходит, то ничего не ставим

Контактные данные

Город*

Выберите городАбаканАксайАлданАлейскАлексеевкаАлупкаАлуштаАльметьевскАнапаАнгарскАпатитыАпрелевкаАрзамасАрмавирАрмянскАртёмАрхангельскАсиноАстраханьАчинскАшаБалаковоБалашихаБарнаулБатайскБатыревоБахчисарайБелгородБелебейБелинскийБеловоБелогорскБелорецкБелореченскБелоярскийБердскБерезникиБийскБиробиджанБлаговещенскБлагодарныйБорисоглебскБратскБрянскБугурусланВеликие ЛукиВеликий НовгородВеликий УстюгВельскВерхнеуральскВидноеВладивостокВладикавказВладимирВолгоградВолгодонскВолжскийВологдаВоркутаВоронежВоскресенскВыборгВязьмаВятские ПоляныГатчинаГлазовГорно-АлтайскГорячий КлючГрозныйГубкинГулькевичиГурьевскДанковДербентДжанкойДзержинскДимитровградДмитровДомодедовоЕвпаторияЕгорьевскЕйскЕкатеринбургЕлабугаЕлецЕнисейскЕссентукиЖелезнодорожныйЖердевкаЖуковскийЗабайкальский крайЗвенигородЗеленоградЗлатоустИвановоИжевскИнзаИнкерманИркутскИшимЙошкар-ОлаКазаньКалачКалининградКалугаКаменск-УральскийКаменск-ШахтинскийКамскКамышинКанашКанскКарталыКасимовКаспийскКашираКемеровоКерчьКигисеппКинельКинешмаКировКирсановКисловодскКлимовскКлинцыКовровКогалымКоломнаКольчугиноКомсомольск-на-АмуреКопейскКоролёвКостомукшаКостромаКотласКрасногорскКраснодарКрасноперекопскКрасноселькупКраснотурьинскКрасноярскКропоткинКрымскКуйбышевКулундаКумертауКурганКурганинскКурскКызылКызыл-ОзекКыштымЛангепасЛенинск-КузнецкийЛивныЛипецкЛугаЛюберцыМагаданМагнитогорскМайкопМалгобекМалоярославецМариинскМарксМахачкалаМегионМиассМинеральные ВодыМихайловскМожайскМоздокМордовияМоскваМурманскМуромМытищиНабережные ЧелныНазраньНальчикНаро-ФоминскНарьян-МарНаходкаНевинномысскНерюнгриНефтекамскНефтеюганскНижневартовскНижнекамскНижний НовгородНижний ТагилНиколаевск-на-АмуреНовокузнецкНовокуйбышевскНовомичуринскНовомосковскНовороссийскНовосибирскНовотроицкНовоуральскНовочебоксарскНовочеркасскНовошахтинскНовый УренгойНогинскНорильскНоябрьскНюренгриНяганьОбнинскОдинцовоОктябрьскийОлонецОмскОпочкаОрёлОренбургОрехово-ЗуевоОрскОтрадныйПавловскПензаПервоуральскПермьПетрозаводскПетропавловск-КамчатскийПечораПодольскПодпорожьеПрокопьевскПсковПушкиноПятигорскРаменскоеРевдаРжевРославльРостовРостов-на-ДонуРубцовскРыбинскРязаньСакиСалаватСалехардСальскСамараСанкт-ПетербургСаранскСарапулСаратовСаровСасовоСаянскСветогорскСевастопольСеверодвинскСегежаСергиев ПосадСерпуховСибайСимферопольСковородиноСлавгородСлавянск-на-КубаниСланцыСмоленскСоветскийСоликамскСолнечногорскСортавалаСосновкаСосновый БорСочиСпасск-ДальнийСреднеуральскСтавропольСтарый КрымСтарый ОсколСтерлитамакСудакСунжаСургутСызраньСыктывкарТаганрогТагилТамбовТатарскТверьТемрюкТихвинТобольскТольяттиТомскТроицкТуапсеТулаТындаТюменьУлан-УдэУльяновскУрайУсинскУссурийскУфаУхтаФеодосияХабаровскХанты-МансийскХасавюртХимкиЧайковскийЧапаевскЧебоксарыЧелябинскЧеремховоЧереповецЧеркесскЧитаЧусовойШахтыЩёлкиноЩёлковоЭлектростальЭлистаЭнгельсЭртильЮжно-СахалинскЮжноуральскЯкутскЯлтаЯрославль

Введите город, в котором оформляется ДК

Нажимая кнопку «Отправить», вы подтверждаете правильность введенных вами данных. Будьте внимательны и проверьте все заполненные поля, оформленные ДК редактированию не подлежат.

Настоящим я подтверждаю, что все данные указаны мною верно, я несу полную ответственность за сообщение ложных сведений в соответствии со статьей 944 Гражданского кодекса РФ; я даю согласие на обработку, использование, передачу страховщиком моих персональных данных в порядке, установленном законодательством РФ.

Правила получения диагностической карты усложнят с 1 марта | В России | 12.01.2021

У меня машины с собой нет.

— Понятно, можно.

— А какие документы для этого нужны?

— Свидетельство, права. Мне нужно, чтобы вы знали свой пробег и резину.

У меня потом не возникнет никаких сложностей?

— Хотите жить честно — живите честно.

Сегодня на российских дорогах около 80% машин не проходили техосмотр. Точнее, проходили, но только на бумаге. Кто-то, может, и доехал до сервиса просто, чтобы забрать заполненный бланк. А кто-то даже не вышел ради этого из дома. Такие документы продают в интернете, доставляют курьерами. Причем еще дешевле. 

Для прохождения осмотра вам может потребоваться: паспорт транспортного средства или свидетельство регистрации транспортного средства, данные с одометра о пробеге автомобиля, марка шин и 5-10 минут свободного времени.

Как результат — только в прошлом году, по данным ГИБДД, из-за разных неисправностей произошло больше шести тысяч аварий. Погибли 960 человек. Статистика пугает. Поэтому в МВД готовятся ужесточить контроль за выдачей диагностических карт. Основная задача — сделать так, чтобы машину действительно проверяли.

По регламенту на проверку легкового автомобиля у эксперта должна уйти 21 минута. За это время он проверит исправность тормозной системы, рулевого управления, подвески, соответствует ли требованиям состояние шин и насколько экологичен у автомобиля выхлоп. 

Должны зажигаться все фары, гореть все лампочки. Никаких сколов на лобовом стекле. В общем, автомобиль должен быть безопасен. Как для владельца, так и для других участников дорожного движения. 

«У нас все машины загоняются, все машины проверяются, какие-то уезжают на дальнейший ремонт. После чего приезжают повторно, и, если все исправлено, техосмотр они получают«, — говорит технический эксперт Дмитрий Халваши.

Так должно быть в идеале. Но пока практически не существует механизма, как инспектор ДПС должен проверить, осматривал ли кто-то машину на самом деле прежде, чем выпустить ее на дорогу. Но уже с первого марта все может измениться. И патрульные получат возможность приостановить действие диагностической карты, если увидят неисправность. Даже неработающие дворники. На устранение у владельца ровно трое суток. После этого — внеочередной техосмотр. Иначе отберут СТС. Эксперты говорят: это может позитивно сказаться и на цене ОСАГО. Страховщики получат дополнительные гарантии. 

«Ни одна страховая компания не будет себя подставлять и выдавать полис ОСАГО, если диагностическая карта недействительна. Потому что могут возникнуть финансовые вопросы«, — говорит автоэксперт Вячеслав Субботин. 

Изменения коснутся и самих сервисов, где выдают карты. Они должны будут предоставить доказательства, что действительно осматривали машину. Делать снимки, загружать их в специальную базу данных. 

«У нас сейчас гайки закручивают. Пока что по старой цене все остается. Пока без фотографий. Но они могут нам завтра или послезавтра, может, с первого марта это сказать«, — говорят в сервисе.

Обойти систему вряд ли получится. Снимать машину нужно будет и на въезде, и на выезде. А значит сервисы, которые ставят диагноз по фотографии, неизбежно закроются. Или, по крайней мере, лишатся лицензии на выдачу диагностических карт. И, вполне возможно, это хоть немного, но подправит пугающую статистику.

Защита от проверки карты

Проверка карты — это тип мошеннической деятельности, когда кто-то пытается определить, действительна ли информация об украденной карте, чтобы использовать ее для совершения покупок. Мошенник может сделать это, купив украденную информацию о кредитной карте, а затем попытавшись проверить или совершить покупки с помощью этих карт, чтобы определить, какие карты все еще действительны. Другими распространенными терминами для тестирования карт являются «кардинг», «тестирование счета» и «проверка карты».

Мошеннические действия, такие как проверка карт, являются неизбежной частью онлайн-торговли.Однако тестирование карт имеет последствия для всей платежной экосистемы, поэтому продавцы, карточные сети и Stripe разделяют ответственность за его предотвращение. В Stripe мы постоянно совершенствуем наши инструменты и системы для обнаружения и сокращения мошенничества, но вы должны сохранять бдительность в отношении мошенничества.

Как работает тестирование карт

Тестеры карт используют как авторизацию, так и платежи, чтобы определить, является ли украденная или сгенерированная информация о карте действительной или нет.

  • Авторизации: Это предпочтительный метод проверки карт, поскольку авторизации обычно не отображаются в выписках держателей карт.Это также снижает вероятность того, что владелец карты заметит мошенническую деятельность или сообщит о ней.
  • Платежи: Специалисты по тестированию карт предпочитают небольшие платежи, которые с меньшей вероятностью будут замечены держателями карт и признаны мошенническими. Это делает страницы пожертвований и предприятия, которые способствуют покупкам на небольшие суммы, идеальными целями для тестировщиков карт.

Последствия

Тестирование карты имеет множество негативных последствий, некоторые из которых со временем ухудшаются по мере продолжения тестирования карты.

  • Споры: Многие виды тестирования карт связаны с платежами, некоторые из которых проходят успешно. Клиенты замечают успешные платежи и сообщают о них как о мошенничестве, что приведет к спорам, которые будут стоить вам времени и денег.
  • Более высокие проценты отказов: Тестирование карт обычно приводит к большому количеству отказов, связанных с вашим бизнесом. Высокий уровень отказов наносит ущерб репутации вашего бизнеса в глазах эмитентов карт и карточных сетей, что делает все ваши транзакции более рискованными.Это может привести к повышенному проценту отклонений законных платежей даже после прекращения тестирования карты.
  • Дополнительные сборы: Деятельность по тестированию карты может привести к дополнительным сборам, таким как сборы за авторизацию для индивидуальных тарифных планов и сборы за оспаривание.
  • Инфраструктурная нагрузка: Проверка карты обычно приводит к многочисленным сетевым запросам и операциям. Этот дополнительный трафик может перегрузить вашу инфраструктуру и нарушить законную деятельность.
  • Наносит ущерб здоровью экосистемы: Тестирование карт оказывает негативное влияние на финансовую систему в целом, поэтому Stripe и наши финансовые партнеры хотят помочь вам остановить это.

Идентификация тестирования карт

Большинство операций по тестированию карт можно идентифицировать по значительному увеличению отказов. При проверке карты вы можете просмотреть отклонения в трех местах на панели инструментов:

  • Платежи, которые были заблокированы из-за проверки карты, будут указаны как таковые при просмотре сведений о платеже для заблокированных транзакций.
  • Графики в разделе «Разработчики» панели инструментов показывают недавнюю активность в вашей учетной записи Stripe. На этих графиках обычно отображаются повышенные показатели отказов, вызванные тестированием карт.
  • Отказы при тестировании конкретных карт будут отмечены в журналах неудачных запросов как ошибки 402.

Эти разделы информационной панели дают вам как общее, так и подробное представление о деятельности по тестированию карт.

Предотвращение тестирования карт

Тестировщики карт используют широкий спектр методов, чтобы затруднить блокировку их мошеннических действий. В результате простых правил или фильтров брандмауэра, основанных на таких вещах, как строки пользовательского агента, обычно недостаточно для предотвращения тестирования карты.

Один из самых популярных способов, с помощью которого тестер карт атакует вас, — это использование секретного ключа Stripe для создания списаний и проверок. Убедитесь, что вы храните свои ключи в безопасности и не публикуете свой секретный ключ публично.

Не разработчик? Используете плагин или платформу? Для предотвращения и смягчения последствий тестирования карты обычно требуются изменения на уровне кода, поэтому вам необходимо показать эту документацию разработчику или поставщику, написавшему код, и работать с ними, чтобы предотвратить тестирование карты.

Оптимизируйте интеграцию с Stripe

Stripe имеет множество автоматических и ручных элементов управления для смягчения последствий тестирования карт, включая ограничители скорости, оповещения, модели машинного обучения, текущие проверки и многое другое.Когда мы впервые обнаружим, что вы подвергаетесь атаке с целью тестирования карты, мы примем все возможные меры, чтобы смягчить атаку.

Однако успех элементов управления Stripe зависит от вашей интеграции и сигналов, которые вы нам отправляете. Мы используем множество сигналов, чтобы отличить тестирование карты от законных платежей. Хотя некоторые из этих сигналов мы вычисляем автоматически, многие из них зависят от информации, предоставляемой вашей интеграцией. В целом, чем больше данных предоставляет ваша интеграция, тем успешнее может быть предотвращение тестирования карт.

Кроме того, интеграция с рекомендуемой интеграцией Stripe позволяет нам автоматически запускать CAPTCHA при подозрении на оплату тестирования карты. CAPTCHA — это эффективная проверка, которая останавливает мошенников, но при этом достаточно эффективна, чтобы ваши хорошие пользователи могли пользоваться вашим сервисом.

Использование одной из наших предпочтительных платежных интеграций позволит вам получить максимальную отдачу от предотвращения тестирования карт Stripe. Если вы не можете использовать предпочтительную интеграцию, включите как можно больше данных или внедрите собственные элементы управления.

Card Тестирование интеграции Качество

Stripe Оплата Ссылки Preferred
нашивки заказ Preferred
Stripe элементы с сигналами клиентов Предпочтительные
Прямая API интеграции с клиентские и клиенты сигналы
Прямая интеграция API с клиентскими сигналами
Прямая интеграция API с сигналами клиентов
Прямой интеграции API без каких-либо дополнительных сигналов

в том числе следующей информации с вашим платежи могут оказать существенное влияние на производительность моделей тестирования карт.Наши предпочтительные интеграции позволяют вам собирать эту информацию, в то время как прямые интеграции могут потребовать явного включения этих данных.

Наконец, ваши ключи API дают вам доступ к системам Stripe и глобальной финансовой сети. Именно этим доступом хотят воспользоваться тестировщики карт, поэтому важно обеспечить безопасность ваших ключей и обеспечить защиту функций, предоставляемых этими ключами, для предотвращения мошенничества и других злонамеренных действий.

Реализуйте элементы управления, если ваша интеграция не может полагаться на предотвращение тестирования карт Stripe

Конечные точки, на которые нацелены тестировщики карт, обычно позволяют им выполнять одно из следующих действий:

  • Прикрепить карту к клиенту
  • Произвести платеж

Добавление безопасности ограничения для конечных точек, предоставляющих эту функциональность, помогут вам предотвратить или смягчить тестирование карты.Ограничения, которые вы вводите, должны сделать тестирование карты непрактичным, практически не влияя на ваш законный трафик.

Конкретные меры безопасности, которые вы добавляете к интеграции, зависят от вашей ситуации и потребностей вашего бизнеса. Несколько распространенных подходов описаны ниже.

Добавить капчу

Тестировщики карт часто используют автоматизированные скрипты, которые можно заблокировать с помощью капчи. Google reCAPTCHA часто эффективно блокирует тестирование карт.Они предоставляют варианты как для видимых, так и для невидимых капч, в зависимости от ваших потребностей. Если вы добавили капчу в свою интеграцию, но тестирование карты не остановилось, проверьте следующее:

  • Убедитесь, что капча требует проверки для всех запросов, которые включают проверку карты или платежи с помощью Stripe.
  • Просмотрите документацию по капче, чтобы убедиться, что она реализована правильно.
  • Если вы используете капчу, которая дает оценку, измените порог, при котором вы предотвращаете успешное выполнение запросов.
  • Попробуйте другое решение проверки, например, переключитесь с невидимой проверки на видимую или используйте другое решение проверки.

Добавить ограничения скорости

В некоторых случаях вы можете остановить тестирование карты, добавив ограничения скорости. Настройте эти ограничения скорости, чтобы остановить определенный тип тестирования карт, с которым вы сталкиваетесь.

Например, если тестировщики карт используют вашу интеграцию для проверки карт, прикрепляя их к новым клиентам, эффективным сдерживающим фактором может быть ограничение количества новых клиентов, которые могут быть созданы одним IP-адресом за один день.

Требовать подтверждение входа или сеанса

Проверка карты часто может быть предотвращена путем запроса входа или подтверждения сеанса при выполнении определенных действий, таких как создание учетной записи или совершение платежа. Некоторые средства защиты от атак с подделкой межсайтовых запросов (CSRF) также эффективны против некоторых типов тестирования карт, таких как токены CSRF.

Обнаружение и предотвращение необычного поведения

Как только вы обнаружите действия по тестированию карт, вы можете сравнить их с типичным законным трафиком, а затем создать правила или фильтры, которые ограничивают или предотвращают только действия по тестированию карт.Например, вы можете внести в свою систему следующие изменения:

  • Ограничить количество карт, которые можно привязать к одному клиенту
  • Ограничить количество клиентов, которые можно создать с одним IP-адресом
  • Отфильтровать запросы с помощью определенные пользовательские агенты или другие параметры

Использовать Radar

Если тестировщики карт осуществляют платежи с вашей интеграцией, вы можете использовать настраиваемые правила Radar для предотвращения мошеннических действий. Например, следующее правило может быть эффективным для остановки некоторых тестов карты.

Блокировать, если :declined_charges_per_ip_address_daily: > 3

Для создания пользовательских правил Radar требуется Radar for Fraud Teams, а правила Radar применяются только к платежам. Радар нельзя использовать, чтобы помешать тестировщикам карт выполнять проверку карт.

Используйте комбинацию мер по смягчению последствий

Возможно, имеет смысл объединить несколько подходов к прекращению тестирования карт, чтобы максимизировать влияние на мошенническую деятельность, не оказывая отрицательного влияния на законный трафик.Например, вы можете комбинировать капчи и ограничения скорости, чтобы первая попытка оплаты с IP-адреса была успешной без ограничений, но последующие запросы, сделанные с того же IP-адреса в течение следующих нескольких часов, требуют проверки капчи для успеха.

Контрольный список активного тестирования карт

Если ваша интеграция используется тестировщиками карт, мы рекомендуем вам немедленно предпринять следующие действия:

  • Определите активность тестирования карт.
  • Возврат мошеннических платежей во избежание споров.
  • Добавьте в интеграцию одно или несколько средств защиты, чтобы остановить тестирование карты.
  • Следите за своей интеграцией, чтобы убедиться, что ваши меры по снижению риска эффективны.

Тестирование карт часто вызывает стресс, но мы здесь, чтобы помочь! Если вам нужна помощь в тестировании карты, сообщите нам об этом!

Следующие шаги

Номера тестовых карт · Центр разработчиков

 {"metadata":{"image":[],"title":"","description":""},"api":{"url" :"","авторизация":"обязательно","результаты":{"коды":[]},"настройки":"","параметры":[]},"далее":{"описание":" ","страницы":[]},"название":"Номера тестовых карт","тип":"базовый","слаг":"тест-кредитные-карты","отрывок":"","тело" :"Следующие номера карт можно использовать для тестирования обычных транзакций по картам в среде BlueSnap Sandbox.В таблице указан ожидаемый результат для каждой тестовой карты, например успешная зарядка или конкретная ошибка. Чтобы протестировать коды ответов AVS и CVV, нажмите [здесь](#section-cvv-and-avs-testing). \n[блок:выноска]\n{\n \"тип\": \"информация\",\n \"тело\": \"* Если столбец CVV-кода пуст и требуется в форме оформления заказа , введите случайный CVV. \\n* Чтобы протестировать другие способы оплаты, такие как [Apple Pay](doc:apple-pay#section-sandbox-testing) или [Visa Checkout](doc:visa-checkout#section-sandbox- тестирование), следуйте инструкциям на странице соответствующего способа оплаты.\\n* [Google Pay™](doc:google-pay) не поддерживает тестовые карты; однако вы можете использовать «живую» карту в тестовой среде Google. Google вернет значение токена с ответом на транзакцию, но не будет списывать средства с вашей карты, когда она используется в их тестовой среде.\\n См. [этот сайт](https://developers.google.com/pay/api/ web/guides/test-and-deploy/integration-checklist#about-the-test-environment) для более подробной информации.\",\n \"title\": \"Примечания:\"\n}\n[/ блок]\n\n[блок:параметры]\n{\n \"данные\": {\n \"h-0\": \"Тип карты\",\n \"h-1\": \"Номер карты\",\n \"h-2\": \"Расч.Дата\",\n \"h-3\": \"CVV-код\",\n \"h-4\": \"Страна/Валюта\",\n \"0-0\": \ "Amex\",\n \"1-0\": \"Amex\",\n \"5-0\": \"JCB\",\n \"6-0\": \"JCB \",\n \"7-0\": \"Mastercard\",\n \"11-0\": \"Visa\",\n \"12-0\": \"Visa\" ,\n \"0-1\": \"374245455400126\",\n \"1-1\": \"378282246310005\",\n \"5-1\": \"3566000020000410\",\ n \"6-1\": \"3530111333300000\",\n \"7-1\": \"5425233430109903\",\n \"11-1\": \"4263982640269299\",\n \ "12-1\": \"4263982640269299\",\n \"0-2\": \"05/2023\",\n \"1-2\": \"05/2023\",\ n \"5-2\": \"02/2023\",\n \"6-2\": \"03/2023\",\n \"7-2\": \"04/2023 \",\n \"11-2\": \"02/2023\",\n \"12-2\": \"04/2023\",\n \"0-3\": \ "\",\n \"1-3\": \"\",\n \"5-3\": \"123\",\n \"6-3\": \"\", \n \"7-3\": \"\",\n \"11-3\": \"837\",\n \"12-3\": \"738\",\n \ "0-4\": \"\",\n \"5-4\": \"JP\\nJPY\",\n \"7-4\": \"\",\n \" 1-4\": \"\",\n \"6-4\": \"JP\\nJPY\",\n \"11-4\": \"\",\n \"12 -4\": \"\",\n \"h-5\": \"Результат\",\n \"0-5\": \"Успех\",\n \"1-5\": \"Неудача\",\n \" 5-5\": \"Успех\",\n \"6-5\": \"Неудача\",\n \"7-5\": \"Успех\",\n \"11- 5\": \"Success\\n`cvvResponseCode`: **MA**\",\n \"12-5\": \"Success\\n`cvvResponseCode`: **NM**\", \n \"3-0\": \"Откройте\",\n \"3-1\": \"6011000180331111\",\n \"3-2\": \"02/2023\", \n \"3-4\": \"US\\nUSD\",\n \"3-5\": \"Успех\",\n \"8-0\": \"Mastercard\" ,\n \"8-1\": \"5425233430109903\",\n \"8-2\": \"12/2004\",\n \"8-5\": \"Неверный эксп.дата\",\n \"9-0\": \"Mastercard\",\n \"9-1\": \"2222420000001113\",\n \"9-2\": \"08/ 2023\",\n \"9-5\": \"Успех\",\n \"10-0\": \"Mastercard\",\n \"10-1\": \"2223000048410010\ ",\n \"10-2\": \"09/2023\",\n \"10-5\": \"Успех\",\n \"16-0\": \"Виза< sup>1\",\n \"16-1\": \"4007702835532454\",\n \"16-2\": \"10/2023\",\n \"16- 4\": \"BR\\nBRL\",\n \"16-5\": \"Успех\",\n \"18-0\": \"Hipercard1 \",\n \"18-1\": \"6062826786276634\",\n \"18-2\": \"09/2023\",\n \"18-5\": \"Успех \",\n \"18-4\": \"BR\\nBRL\",\n \"22-0\": \"Наранджа1\",\n \" 22-1\": \"5895626746595650\",\n \"22-2\": \"11/2023\",\n \"22-4\": \"АР\\nАРС\",\ n \"22-5\": \"Успех\",\n \"23-0\": \"Натива1\",\n \"23-1\": \ "5200533989557118\",\n \"23-2\": \"11/2023\",\n \"23-4\": \"АР\\nАРС\",\n \"23-5\ ": \"Успех\",\n \"24-0\": \"Tarjeta Shopping1\",\n \"24-1\": \"6034883265619896\",\ н \"24-2\": \ "09/2023\",\n \"24-4\": \"АР\\nАРС\",\n \"24-5\": \"Успех\",\n \"17-0\ ": \"ELO1\",\n \"17-1\": \"6362970000457013\",\n \"17-2\": \"08/2023\", \n \"17-4\": \"BR\\nBRL\",\n \"17-5\": \"Успех\",\n \"19-0\": \"Argencard1\",\n \"19-1\": \"5011054488597827\",\n \"19-2\": \"12/2023\",\n \"19-4 \": \"АР\\nАРС\",\n \"19-5\": \"Успех\",\n \"20-0\": \"Кабала1\ ",\n \"20-1\": \"6271701225979642\",\n \"20-2\": \"03/2023\",\n \"20-4\": \"АР\ \nАРС\",\n \"20-5\": \"Успех\",\n \"21-0\": \"Ценкосуд1\",\n \"21 -1\": \"6034932528973614\",\n \"21-2\": \"06/2023\",\n \"21-4\": \"АР\\nАРС\",\n \"21-5\": \"Успех\",\n \"15-0\": \"Visa1\",\n \"15-1\": \" 40017537193\",\n \"15-2\": \"09/2023\",\n \"15-4\": \"BR\\nBRL\",\n \"15-5\" : \"Успех\",\n \"4-0\": \"Открытие\",\n \"4-1\": \"60110009009\",\n \"4-2\": \ "12/2023\",\n \"4-4\": \"США\\nUSD\",\n \"4 -5\": \"Успех\",\n \"14-0\": \"Виза\",\n \"14-1\": \"44589897107\",\n \"14-2 \": \"01/2023\",\n \"14-4\": \"ARS\\nEUR\\nUSD\",\n \"14-5\": \"Неудача\",\ n \"2-0\": \"China Union Pay\",\n \"2-1\": \"6250941006528599\",\n \"2-2\": \"06/2023\" ,\n \"2-5\": \"Успех\",\n \"2-4\": \"CN\\nUSD\",\n \"2-3\": \"\" ,\n \"13-0\": \"Виза\",\n \"13-1\": \"4263982640269299\",\n \"13-2\": \"02/2023\" ,\n \"13-3\": \"887\",\n \"13-5\": \"Успех\\n`cvvResponseCode`: **ND**\"\n },\n \"столбцы\": 6,\n \"строки\": 25\n}\n[/block]\n1 Поддерживается только для тестирования [Латинская Америка](doc:latam-local- обработка) интеграции.Сначала для вашей учетной записи необходимо включить обработку в Латинской Америке, обратившись в [службу поддержки продавцов](https://bluesnap.zendesk.com/hc/en-us/requests/new?ticket_form_id=360000127087).\n\n# Тестирование CVV и AVS\ n Таблицы в этом разделе можно использовать для проверки кодов ответов CVV и AVS. \n\nСмотрите: \n[Карточки для проверки кодов ответов CVV](#section-cards-for-testing-cvv-response-codes)\n[Карты для проверки кодов ответов AVS](#section-cards-for-testing -avs-response-codes)\n\n## Карты для тестирования кодов ответов CVV \nСледующие карты можно использовать для тестирования [кодов ответов CVV](doc:cvv-response-codes).В запросе API укажите указанные данные тестовой карты и сумму транзакции из таблицы для достижения желаемого результата.\n\n**Примечание.** Обратитесь к специалисту по внедрению, чтобы ваша учетная запись могла быть настроена для тестирования. \n[блок:параметры]\n{\n \"данные\": {\n \"h-0\": \"Тип карты\",\n \"h-1\": \"Номер карты \",\n \"h-2\": \"Дата истечения\",\n \"h-3\": \"CVV\",\n \"h-4\": \"Сумма \",\n \"h-5\": \"Код ответа CVV\",\n \"0-0\": \"Visa\",\n \"0-1\": \"4005550000000019 \",\n \"0-2\": \"04/2023\",\n \"0-3\": \"111\",\n \"0-4\": \"97 .52\",\n \"0-5\": \"ND\",\n \"1-1\": \"4503300000000008\",\n \"1-0\": \"Visa\ ",\n \"1-2\": \"04/2023\",\n \"1-3\": \"431\",\n \"1-4\": \"97,52\ ",\n \"1-5\": \"ND\",\n \"2-0\": \"Виза\",\n \"2-1\": \"4205260000000005\", \n \"2-2\": \"05/2023\",\n \"2-3\": \"213\",\n \"2-4\": \"0.0\", \n \"2-5\": \"МА\",\n \"3-0\": \"Виза\",\n \"3-1\": \"4001270000000000\",\n \"3-2\": \"05/2023\",\n \"3-3\": \"222\",\n \"3-4\": \"0.0\",\n \"3-5\": \"МА\",\n \"4-0\": \"Виза\",\n \"4-1\": \"4012000033330026\",\n \" 4-2\": \"05/2023\",\n \"4-3\": \"566\",\n \"4-4\": \"97.52\",\n \"4-5\": \"МА\",\n \"5-0\": \"Виза\",\n \"5-1\": \"4005562233445564\ ",\n \"5-2\": \"03/2023\",\n \"5-3\": \"212\",\n \"5-4\": \"0.0\ ",\n \"5-5\": \"NM\",\n \"6-0\": \"Visa\",\n \"6-1\": \"4311780000241409\", \n \"6-2\": \"03/2023\",\n \"6-3\": \"434\",\n \"6-4\": \"0.0\", \n \"6-5\": \"NP\",\n \"7-0\": \"Visa\",\n \"7-1\": \"4012000033330026\",\n \"7-2\": \"02/2023\",\n \"7-4\": \"58.30\",\n \"7-3\": \"121\",\n \"7-5\": \"NP\",\n \"8-0\": \"Visa\",\n \"8-1\": \"4311780000241417\",\n \" 8-2\": \"01/2023\",\n \"8-3\": \"733\",\n \"8-4\": \"0.0\",\n \"8-5\": \"NC\",\n \"9-0\": \"China Union Pay\",\n \"9-1\": \" 6250941006528599\",\n \"9-2\": \"06/2023\",\n \"9-3\": \"738\",\n \"9-4\": \" 11.00\",\n \"9-5\": \"MA\",\n \"10-0\": \"Откройте для себя\",\n \"10-1\": \"60110009818\ ",\n \"10-2\": \"12/2023\",\n \"10-3\": \"333\",\n \"10-4\": \"14.00\ ",\n \"10-5\": \"ND\"\n },\n \"cols\": 6,\n \"rows\": 11\n}\n[/block]\ n## Карты для тестирования кодов ответов AVS\nСледующие карты можно использовать для тестирования [кодов ответов AVS](doc:avs-response-codes).В запросе API укажите указанные данные тестовой карты и сумму транзакции из таблицы для достижения желаемого результата.\n\n**Примечание.** Обратитесь к специалисту по внедрению, чтобы ваша учетная запись могла быть настроена для тестирования. \n[блок:параметры]\n{\n \"данные\": {\n \"h-0\": \"Тип карты\",\n \"h-1\": \"Номер карты \",\n \"h-2\": \"Дата истечения\",\n \"h-3\": \"CVV\",\n \"h-4\": \"Сумма \",\n \"h-5\": \"Адресный код ответа\",\n \"h-6\": \"Почтовый код ответа\",\n \"1-0\": \ "Виза\",\n \"1-1\": \"4012000033330026\",\n \"1-2\": \"11/2023\",\n \"1-3\": \ "371\",\n \"1-4\": \"10.60\",\n \"1-5\": \"М\",\n \"1-6\": \"М\",\n \"2-0\": \"Виза\ ",\n \"2-1\": \"4012000033330026\",\n \"2-2\": \"03/2023\",\n \"2-3\": \"837\ ",\n \"2-4\": \"97,52\",\n \"2-5\": \"Н\",\n \"2-6\": \"Н\", \n \"3-0\": \"Visa\",\n \"3-1\": \"4012000033330026\",\n \"3-4\": \"58.30\",\n \"3-3\": \"837\",\n \"3-5\": \"U\",\n \"3-6\": \"M\",\n \" 3-2\": \"10/2023\",\n \"4-0\": \"Виза\",\n \"4-1\": \"40055100004\",\n \" 4-2\": \"06/2023\",\n \"4-3\": \"371\",\n \"4-4\": \"10.60\",\n \"4-5\": \"U\",\n \"4-6\": \"U\",\n \"5-0\": \"Откройте\ ",\n \"5-1\": \"60110009818\",\n \"5-2\": \"01/2023\",\n \"5-3\": \"371\ ",\n \"5-4\": \"14.00\",\n \"5-5\": \"N\",\n \"5-6\": \"M\", \n \"0-0\": \"Visa\",\n \"0-1\": \"4205260000000005\",\n \"0-3\": \"837\",\n \"0-2\": \"04/2023\",\n \"0-4\": \"0.0\",\n \"0-5\": \"M\",\n \"0-6\": \"M\"\n },\n \"столбцы\": 7,\n \"строки\": 6\n}\n[/блок]","обновления" : [ "5ad7ab5114cc2100035fb9a7", "5aead786c133880003160862", "5f89d210dc052800264ef939", "60167c0e9b97dd00249a87e1", "601cf7e745c1260011d2e399", "6030fe08042952008148d699", "605f2d64aa9f31000f1df12e", "60abe9545a6547004a3869d1", "60abec2fce4725002bcef180", "612b807279487500778d04e0", "61e72779987d3f005c8e56de", "62256f2c6426ab002e78159e", "623f3b666bb615006a4c822d"],"order":1,"isReference":false,"hidden":false,"sync_unique":"","link_url":"","link_external":false,"_id":"6226230526913831dab" ,"категория":{"синхронизация":{"isSync":false,"url":""},"страницы" :[],"title":"Ссылка","слаг":"данные тестовой карты","заказ":6,"from_sync":false,"ссылка":false,"_id":"6226230526913831da0", «версия»: «6226230526913831de5», «проект»: «57336fd5a6a9c40e00e13a0b», «createdAt»: «2016-05-12T13:32:23.269Z","__v":0},"parentDoc":null,"user":"560d5913af972318124","project":"57336fd5a6a9c40e00e13a0b","версия":{"версия":"8976-Основы","version_clean" :"8976.0.0-Основы","кодовое имя":"Выпуск 3.41","is_stable":true,"is_beta":false,"is_hidden":false,"is_deprecated":false,"categories":["6226230526913831d9c" , "6226230526913831d9d", "6226230526913831d9e", "6183ed028202aa001610248b", "6226230526913831d9f", "6226230526913831da0", "5beb278ac442ab0213f00990", "6226230526913831da1", "5c3f542c12c4ac004bc51718", "6183ed028202aa001610248f", "5df806ccecebde0059f17225", "5dfa8a8f340c2b007418eb8a", "6226230526913831da2",» 5E597199FD2B0200117C2C1C "]," _ ID ":" 6226230526913831DE5 "," Project ":" 57336FD5A6A9C40E00E13A0B "," __ V ": 0," FORKED_FROM ":" 618E0B ".535Z","releaseDate":"2018-04-23T14:36:48.535Z"},"createdAt":"2016-02-04T16:49:55.341Z","githubsync":"","__v":12 } 

Быстрые диагностические тесты на малярийные паразиты

Clin Microbiol Rev., 2002 г., январь, 15(1): 66–78. , Capper St., London WC1E 6AU, United Kingdom Телефон: 0207 387 9300, доб. 5411. Факс: 0207 383 0041. Электронная почта: [email protected] © 2002, Американское общество микробиологииЭта статья цитировалась в других статьях PMC.

ВВЕДЕНИЕ

Малярия представляет собой диагностическую проблему для лабораторий в большинстве стран. В этой статье делается попытка рассмотреть существующую методологию и подход к диагностике малярии практическим и полезным способом для лаборатории и врача, ухаживающего за пациентом. Срочность и важность быстрого получения результатов исследования образцов крови пациентов с подозрением на острую малярию делают некоторые из наиболее чувствительных методов диагностики малярии непрактичными для рутинного лабораторного использования.Для целей настоящего обзора лабораторные методы, требующие более 1 часа для постановки четкого диагноза малярии, не считаются экспресс-тестами, хотя их можно считать эталонными процедурами.

Эндемичная малярия, перемещения населения и зарубежные поездки — все это усугубляет проблемы диагностики малярии, с которыми сталкиваются лаборатории, не располагающие соответствующими знаниями в области микроскопии. Изменение моделей общепринятых морфологических проявлений малярийных видов, возможно, из-за воздействия лекарств, изменчивости штамма или подходов к сбору крови, создало диагностические проблемы, которые нелегко решить, просто обратившись к атласу паразитологии.К счастью, новые технологии предоставляют дополнительные возможности диагностики, которые можно просмотреть и сравнить с более традиционными методами. Одновременно Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) начала диалог с учеными, клиницистами и производителями устройств для диагностики малярии относительно реальных возможностей разработки точных, чувствительных и экономически эффективных экспресс-тестов для диагностики малярии. Условия для этих экспресс-тестов включают возможность обнаружения 100 паразитов/мкл из всех Plasmodium spp.и возможность выполнять полуколичественные измерения для мониторинга результатов лечения наркозависимости. Кроме того, эти новые технологии необходимо сравнивать с принятыми методами «золотого стандарта».

Большинство случаев малярии регистрируется в странах, где рентабельность является важным фактором, простота проведения диагностических тестов и обучение персонала также являются важными факторами. Большинство новых технологий диагностики малярии включают процедуры иммунохроматографического захвата с конъюгированными моноклональными антителами, обеспечивающими индикатор инфекции.Предпочтительными антигенами-мишенями являются антигены, которых много на всех бесполых и половых стадиях паразита; в настоящее время интерес сосредоточен на обнаружении богатого гистидином белка 2 (HRP-2) из ​​ Plasmodium falciparum и паразитоспецифической лактатдегидрогеназы (pLDH) или альдолазы Plasmodium из гликолитического пути паразита, обнаруженного у всех видов. Клинические исследования обеспечивают эффективное сравнение различных форматов тестов, а также уточнение осуществимости и клинической значимости использования немикроскопических методов.

СТАНДАРТНАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА

Окрашенные мазки крови

Общепринятой лабораторной практикой для диагностики малярии является приготовление и микроскопическое исследование мазков крови, окрашенных по Гимзе, Райту или Филду (69). Кровь, полученная путем укола пальца или мочки уха, является идеальным образцом, поскольку плотность развитых трофозоитов или шизонтов выше в крови из этой богатой капиллярами области (17). Кровь, полученная путем венепункции, собранная в пробирки с антикоагулянтом, покрытым гепарином или секвестрином (ЭДТА), приемлема, если она используется вскоре после забора для предотвращения изменения морфологии лейкоцитов (лейкоцитов) и малярийных паразитов.Должны быть приготовлены как толстые, так и тонкие мазки крови.

Толстый мазок крови.

Толстый мазок крови концентрирует слои эритроцитов (эритроцитов) на малой поверхности в 20–30 раз и окрашивается в виде незафиксированного препарата по Филду или в разбавленном растворе по Райту или Гимзе. Толстый мазок крови обеспечивает повышенную чувствительность методики исследования мазка крови и намного лучше тонкого мазка позволяет выявлять низкий уровень паразитемии и повторное появление циркулирующих паразитов при обострении или рецидиве инфекции.Лизис эритроцитов в процессе окрашивания может затруднить процесс поиска паразитов до тех пор, пока не будет накоплен опыт поиска паразитов среди лейкоцитов и тромбоцитов.

Тонкий мазок крови.

Тонкий мазок крови фиксируют метанолом и окрашивают разбавленным красителем Гимзы или Райта с использованием забуференной воды с рН 7,2, чтобы подчеркнуть включения паразитов в эритроцитах. Из-за фиксированного монослоя эритроцитов, доступного в этой процедуре, морфологическая идентификация паразита на уровне вида намного проще и обеспечивает большую специфичность, чем толстопленочное исследование.Тонкий мазок крови часто предпочтительнее для рутинной оценки паразитемии, потому что микроорганизмы легче увидеть и подсчитать. Возможность подсчета паразитов в последовательных мазках крови позволяет отслеживать реакцию на терапию, особенно при инфекциях, вызванных P. falciparum .

Чувствительность толстого мазка крови.

Ожидаемая чувствительность, которую может достичь опытный микроскопист при исследовании толстого мазка крови, составляет около 50 паразитов/мкл крови (при общем количестве эритроцитов 5 × 10 6 /мкл крови), что эквивалентен 0.001% инфицированных эритроцитов. Милн и др. (48) обнаружили, что большинство обычных диагностических лабораторий, как правило, достигают более низкой чувствительности обнаружения (в среднем, 0,01% инфицированных эритроцитов, 500 паразитов/мкл) при изучении результатов британских лабораторий, представленных в Референс-лабораторию по малярии.

Техника анализа крови претерпела очень мало усовершенствований с момента ее разработки в начале 1900-х годов. Хотя в настоящее время доступны более стабильные красители, процесс окрашивания может занять до 60 минут подготовки для получения окрашенной тонкой или толстой пленки и является трудоемким.Интерпретация требует значительного опыта, особенно при низких уровнях паразитемии (69). Кроме того, у пациентов с малярией P. falciparum паразиты могут быть изолированы в глубоких капиллярах (селезенка, печень, костный мозг), и организмы могут не обнаруживаться в эквивалентных количествах в циркулирующей периферической крови, взятой при венепункции или взятии пальца. Таким образом, инфекцию P. falciparum можно легко пропустить из-за недостаточного количества паразитов для обнаружения в мазках крови.Исследование мазков крови после лечения может привести к обнаружению ряда циркулирующих паразитов; однако микроорганизмы могут быть мертвы и еще не очистились от хозяина, что продлевает предполагаемый положительный результат пациента и продлевает лечение (65).

Оценка паразитемии с помощью мазков крови

Одним из наиболее важных аспектов сообщения о малярийных инфекциях с помощью методов лабораторной диагностики является информация, полученная при оценке уровня паразитемии, присутствующего в мазке крови.Морфологическая оценка паразитов также имеет решающее значение для точной интерпретации, особенно отмечая стадии развития и наличие бесполых паразитов, содержащих пигмент гемозоина, при сообщении об инфекциях P. falciparum . Эта информация может свидетельствовать о возможности более тяжелой клинической ситуации, особенно поражения головного мозга, вследствие выхода в периферический кровоток развивающихся шизонтных стадий секвестрированных в капиллярах паразитов.В этих обстоятельствах может потребоваться изменение метода введения препарата с перорального на внутривенный путь.

Описано несколько методов оценки паразитемии ( Учебное пособие по базовой микроскопии малярии ВОЗ , ВОЗ, Женева, Швейцария) с использованием тонкого или толстого мазка крови. Важно, чтобы каждый положительный мазок крови оценивался, а паразитемия регистрировалась точно так же, как и в исходном образце пациента.

Исследование толстых мазков крови.

Признанным способом оценки количества паразитов, присутствующих в 1 мкл крови, является использование стандартного значения количества лейкоцитов (8000 лейкоцитов/мкл). Подсчет количества присутствующих паразитов до тех пор, пока не будет обнаружено 200 лейкоцитов, а затем умножение подсчитанных паразитов на 40 даст количество паразитов на микролитр крови. Если известен точный подсчет лейкоцитов, его можно использовать для получения более точной цифры с соответствующей корректировкой коэффициента умножения.

Наиболее точные подсчеты получаются при подсчете общего количества паразитов в измеренном объеме крови. Объем крови должен быть не менее 2 мкл и распределяться на площади 1 см 2 . Однако этот метод требует много времени, и подсчет паразитов против 200 лейкоцитов в толстой пленке, если известен точный общий подсчет лейкоцитов, дает удовлетворительную точность для большинства клинических целей.

Основным недостатком толстого мазка крови является лизис эритроцитов в процессе окрашивания, что затрудняет чтение слайда из-за отсутствия признаков эритроцитов и неравномерности толщины пленки.Используя толстую пленку для оценки интенсивности паразитарной инфекции, исследователь теоретически должен подсчитывать паразитов только в областях толстой пленки, содержащих не более 20 лейкоцитов/100× поле иммерсионного масла. На самом деле поля, содержащие 20 лейкоцитов, часто слишком толстые для подсчета, в то время как поля, которые легче всего читать, содержат только 5 или 6 лейкоцитов. Было высказано предположение, что перед окрашиванием микроскопист должен уметь читать отпечаток через хорошо подготовленный толстый мазок крови. Перенос паразитов с положительных препаратов на отрицательные вполне возможен, и следует соблюдать осторожность при массовом окрашивании толстых препаратов крови.Использование масляных иммерсионных объективов 50x или 60x может оказаться недостаточным для идентификации некоторых более мелких кольцевых форм, видимых на толстой пленке, и в этих обстоятельствах необходимы окуляры 10x для микроскопа.

Warhurst и Williams (69) сообщили, что исследование тонких мазков крови лишь на 1/10 менее чувствительно, чем исследование толстых мазков крови для количественного определения малярийных паразитов, хотя морфологическая идентификация присутствующих видов Plasmodium намного проще при использовании тонких мазков. фильмы.Поэтому большинство лабораторий, занимающихся количественным определением и идентификацией малярийных паразитов с помощью микроскопии, производят как толстые, так и тонкие мазки крови. Настоятельно рекомендуется готовить и исследовать как толстые, так и тонкие мазки каждый раз, когда требуется исследование мазка крови на наличие паразитов.

Исследование тонких мазков крови.

Паразитемию можно оценить при исследовании хорошо окрашенного тонкого мазка крови. Обычно это достигается путем определения количества зараженных эритроцитов (не отдельных паразитов), наблюдаемых в 10 000 эритроцитов (примерно 40 монослойных клеточных полей стандартного микроскопа с масляным иммерсионным объективом 100x; тем не менее, микроскопистам рекомендуется подсчитывать среднее количество эритроцитов). клеток на поле зрения микроскопа для своих собственных микроскопов) и выражая количество видимых паразитированных клеток в процентах.Приблизительное количество паразитов, присутствующих в 1 мкл крови, можно рассчитать, приняв, что 1 мкл крови содержит 5 × 10 6 эритроцитов; следовательно, 1% паразитемия будет содержать 1 паразита на 100 эритроцитов или 50 000 паразитов на мкл крови. Точно так же паразитемия 0,1% будет содержать 5000 паразитов/мкл крови. Это может быть скорректировано для точного подсчета, если известно общее количество эритроцитов на микролитр.

Этот метод выражения паразитемии в виде процента заражения эритроцитов является методом выбора для рутинной практики в районах, где инфекция не является эндемичной, где паразитемии обычно мало.Подсчет паразитов на ограниченном участке толстой пленки (10 полей) допустим при обнаружении большего количества паразитов в зонах эндемического заражения.

Микроскопическое исследование мазков крови признано в настоящее время универсальным «золотым стандартом» диагностики малярии; однако не существует общепринятого единого стандартного метода, используемого в настоящее время всеми исследователями для количественного определения паразитов. Hanscheid (19) обсудил проблемы, которые могут возникнуть, когда сравниваются различные методы диагностики малярии, а для оценки паразитемии не используется согласованный формат, по которому можно было бы проводить сравнение чувствительности для обнаружения паразитов.Тем не менее, мазок крови по-прежнему является единственным широко доступным результатом, с которым можно сравнивать более новые методы диагностики малярии, хотя для сопоставимости следует также использовать последовательный метод подсчета паразитов в толстых или тонких мазках крови.

ДИАГНОСТИКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИИ

В попытке улучшить обнаружение малярийных паразитов в мазках крови были внедрены альтернативные методы. Некоторые флуоресцентные красители имеют сродство к нуклеиновой кислоте в ядре паразита и прикрепляются к ядрам.При возбуждении УФ-светом с соответствующей длиной волны ядро ​​будет сильно флуоресцировать. Для этой цели часто использовались два флуорохрома, акридиновый оранжевый (AO) и бензотиокарбоксипурин (BCP), которые оба возбуждаются при 490 нм и проявляют яблочно-зеленую или желтую флуоресценцию. Родамин-123 также полезен для оценки жизнеспособности паразитов, поскольку его поглощение зависит от неповрежденной работающей паразитарной мембраны.

Опубликовано несколько методов, в которых АО используется либо как метод прямого окрашивания, либо в сочетании с методом концентрации, таким как толстый мазок крови (10, 15).Центробежный количественный лейкоцитарный слой или QBC II (QBC) (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) сочетает в себе капиллярную трубку с АО-покрытием и внутренний поплавок для разделения слоев лейкоцитов и тромбоцитов с помощью центрифугирования. Паразиты концентрируются ниже этого слоя клеток, появляясь в верхнем слое эритроцитов, но иногда также появляясь в слоях тромбоцитов и лейкоцитов. Паразитов можно рассмотреть через капиллярную трубку с помощью специального длиннофокусного объектива (паралинзы) с флуоресцентным микроскопом (рис.) (1, 6, 9, 16). В более простом методе Кавамото используется фильтр возбуждения, установленный на пути проходящего светового луча, который позволяет волне возбуждения АО (от 470 до 490 нм) проходить к окрашенной пленке. Второй фильтр (510 нм) помещают в окуляр для просмотра флуоресцирующих паразитов, окрашенных АО. Этот метод может использовать сильный солнечный свет (если используется экран, закрывающий глаза наблюдателя) или кварцевый галогенный источник в качестве источника возбуждающей длины волны (20, 21, 32, 33).

Трофозоиты P.falciparum , окрашенный АО методом УФ-флуоресценции QBC.

Клинические испытания с использованием методов АО (1, 4, 5, 6, 9, 15, 37, 39, 74) проводились в лабораторных и полевых условиях. Флуоресцентный метод QBC является более сложным с технической точки зрения и требует специального оборудования для разделения слоев клеток путем центрифугирования и хорошего флуоресцентного микроскопа с высокоинтенсивной ртутной или кварцево-галогенной лампой для обеспечения длины волны возбуждения.

Хотя АО является очень интенсивным флуоресцентным красителем, он неспецифичен и окрашивает нуклеиновые кислоты всех типов клеток.Следовательно, микроскопист, использующий АО, должен научиться отличать флуоресцентно окрашенных паразитов от других клеток и клеточного детрита, содержащего нуклеиновые кислоты (10). Особая осторожность необходима при наличии телец Хауэлла-Джолли в поле в крови больных гемолитической анемией. Сообщалось, что чувствительность окрашивания АО для обнаружения малярийных паразитов при инфекциях с уровнем паразитов <100 паразитов/мкл (0,002% паразитемии) колеблется от 41 до 93% (73). Специфичность для инфекций с P.falciparum превосходен (>93%) (16), при этом большинство наблюдателей распознают маленькие кольцевые формы. Кольцевые формы или ранние трофозоиты других видов могут привести к неправильной диагностике, особенно в ранней фазе бесполого цикла, когда могут присутствовать только кольцевые формы. Было обнаружено, что для P. vivax и других инфекций, не относящихся к P. falciparum , особенно на более поздних стадиях развития, специфичность при окрашивании АО оказалась ниже (52%), особенно для центрифужного метода QBC, где более плотные паразиты на поздних стадиях могут быть скрыты в отделившемся слое мононуклеарных клеток.

В альтернативной процедуре флуорохромирования используется раствор BCP (7, 8, 40). BCP можно наносить непосредственно на лизированную суспензию крови или на нефиксированный, но сухой толстый мазок крови, и он интенсивно окрашивает нуклеиновую кислоту жизнеспособных паразитов P. falciparum . Напротив, включения эритроцитов и ядра лейкоцитов окрашиваются плохо (рис. ). Этот метод преодолевает некоторые проблемы, присущие некоторым флуоресцентным системам, такие как необходимость быстрого исследования для предотвращения выцветания или осаждения красителя.В нескольких сообщениях об использовании этого соединения было обнаружено, что это чувствительный и быстрый диагностический метод, сравнимый с окрашиванием по Гимзе, с заявленной чувствительностью и специфичностью >95% для P. falciparum . Паразиты, отличные от P. falciparum , легче различить в толстопленочном препарате, чем в лейкоцитарной пленке QBC.

Трофозоиты P. falciparum , окрашенные БЦФ методом флуоресценции.

Обладая опытом, работники, использующие методы с использованием соединений флуорохрома, могут быстро и точно обнаруживать паразитов.Однако важным ограничением методов, включающих как АО, так и BCP, является их неспособность легко дифференцировать Plasmodium spp. С опытом, различные стадии малярии, наблюдаемые в периферической крови, могут быть локализованы в определенных областях центрифугированного лейкоцитарного слоя (ЦБК), но специфическая идентификация видов остается затруднительной без наблюдения морфологии эритроцитов и включений паразитов. Несмотря на некоторые сомнения в отношении использования флуоресцентных методов для выявления малярии (10), в том числе на необходимость специальной подготовки и дорогостоящего оборудования и расходных материалов, флуоресцентная микроскопия остается жизнеспособной и быстрой альтернативой окрашиванию по Романовскому.В некоторых регионах мира по-прежнему будет существовать проблема, где нет флуоресцентных микроскопов или адекватного обучения их использованию. В этих регионах потенциально полезными будут альтернативные немикроскопические тесты для диагностики малярии (41).

ОБНАРУЖЕНИЕ КОНКРЕТНЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ

ПЦР не может строго рассматриваться как экспресс-метод первоначальной диагностики малярии. Его ценность заключается в его чувствительности и способности обнаруживать пять паразитов или менее на 1 мкл крови (64).Методы гнездовой и мультиплексной ПЦР могут дать ценную информацию при возникновении сложных морфологических проблем при попытках идентификации паразитов до видового уровня. Ряд ПЦР-анализов был разработан для обнаружения ДНК малярии в цельной крови как одиночные, так и мультиплексные методы (2, 27, 34, 61, 62, 64, 70, 71). Эти тесты использовались для первоначальной диагностики, после ответа на лечение и в качестве чувствительных стандартов, по которым оценивались другие немолекулярные методы.

Гены малой субъединицы 18S рРНК и циркумспорозоита (CS) использовались в качестве мишеней для дифференцировки Plasmodium spp. Методы с использованием вложенной ПЦР и ПЦР с обратной транскрипцией позволяют идентифицировать все четыре вида (2, 34, 54, 63, 64, 69, 70, 71). Ген большой субъединицы РНК широко консервативен среди Plasmodium spp. и также пригоден в качестве целевой области ДНК, специфичной для рода (29), при этом амплифицированная последовательность-мишень выявляется с помощью внутренних зондов или анализируется с помощью гель-электрофореза.

Другие ДНК-мишени, такие как ген CS, использовались для видоспецифичных областей и сочетались со специфическими флуоресцеиновыми или радиоактивно меченными зондами для обнаружения P. vivax . Сетабутр и др. (62), используя две системы амплификации, K1-14 (ДНК) и CS, использовали ПЦР для мониторинга ответа на терапию у 33 пациентов с инфекциями P. falciparum . В 103 образцах, исследованных в целом, системы K1-14 и CS выявили 95 и 93% микроскопически положительных случаев соответственно.На 1-й день после лечения выявление ПЦР упало до 50% (К1-14) и 20% (КС) случаев, а на 4-й день после лечения только 3 и 0% были выявлены с помощью ПЦР. Использование двух независимых систем ПЦР показало, что ДНК P. falciparum временно присутствовала в крови инфицированных пациентов в то время, когда паразиты уже не могли быть обнаружены под микроскопом.

Основными преимуществами использования метода на основе ПЦР являются возможность обнаружения малярийных паразитов у пациентов с низким уровнем паразитемии и их идентификация до видового уровня.Заражение пятью или менее паразитами на мкл можно обнаружить со 100% чувствительностью и равной специфичностью (34, 64). Дополнительная чувствительность, полученная с помощью ПЦР, может дать положительные результаты при субпатентных инфекциях. Хотя многие организмы могут оставаться секвестрированными в капиллярном русле, эти паразиты могут попасть в кровоток, но в недостаточном количестве, чтобы их можно было обнаружить только с помощью микроскопии периферической крови.

Несколько сотрудников исследовали персистенцию ДНК в крови после лечения.Каин и др. (30) исследовали исчезновение паразитов P. falciparum во время лечения и обнаружили, что ПЦР оставалась положительной в среднем в течение 144 часов по сравнению с 66 часами при микроскопии. Авторы также сообщили, что если ПЦР дает положительные результаты в течение 5-8 дней после лечения, можно прогнозировать терапевтическую неудачу, возможно, из-за лекарственной устойчивости. Однако Шринавасан и соавт. (65) отметили, что ПЦР обнаруживает ДНК циркулирующих нежизнеспособных паразитов после успешной терапии, что может привести к клинической путанице.

Различия в результатах ПЦР, полученных в ряде различных исследований, могут отражать различия в методах сбора и хранения образцов, методах выделения ДНК и выбора праймеров, условиях амплификации и анализе амплифицированного продукта. Дальнейшие достижения в технологии ПЦР могут позволить отличить ДНК от жизнеспособных или нежизнеспособных паразитов и, таким образом, облегчить использование основанных на ПЦР процедур в полевых условиях (69). Методы на основе ПЦР особенно полезны для изучения изменчивости штаммов, мутаций и изучения генов паразитов, участвующих в лекарственной устойчивости.Способность обнаруживать все виды Plasmodium во вложенных или мультиплексных анализах и повышенная чувствительность делают их идеальными процедурами для диагностики малярии. Прогресс в методах быстрой экстракции ДНК и в разработке термоциклеров, возможно, с использованием недавно разработанных светоциклеров, может позволить проводить амплификацию ДНК малярийного паразита в течение времени, клинически значимого для неотложной диагностики как в полевых, так и в лабораторных условиях. В настоящее время это не так, и микроскопия остается основным методом диагностики для большинства клинико-диагностических центров.

НЕМИКРОСКОПИЧЕСКИЕ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ТЕСТЫ

На недавнем конгрессе ВОЗ был подготовлен документ под названием Новые перспективы диагностики малярии (WHO/MAL/2000.1091) (74). Были представлены определенные рекомендации о том, что должны давать немикроскопические экспресс-тесты (ДЭТ). В документе сделан вывод о том, что результаты этих тестовых устройств должны быть, по крайней мере, такими же точными, как и результаты, полученные при микроскопии, выполненной средним специалистом в обычных полевых условиях. Другие критерии включали чувствительность, которая должна быть выше 95% по сравнению с микроскопией, и обнаружение паразитемии, такое, чтобы уровни 100 паразитов/мкл (0.002% паразитемия) должна быть надежно обнаружена с чувствительностью 100%. Количественная или полуколичественная информация о плотности паразитов в циркулирующей крови считалась важной. Другими предложенными важными критериями были способность отличать жизнеспособных паразитов от паразитарных продуктов, таких как антигены или нуклеиновые кислоты, не связанные с жизнеспособными организмами, а также предсказывать результаты лечения или резистентность к обычным противомалярийным препаратам.

Эти цели предъявляют высокие требования как к ученым, так и к производителям, и степень, в которой они были или могут быть достигнуты, наряду с экономическими соображениями, поставит перед учеными, участвующими в разработке этих ДЭТ для малярии, ряд интересных задач.

Хотя альтернативные окрашенным мазкам крови методы диагностики малярии существуют уже довольно давно (65), ранние методы, основанные на выявлении флуоресцирующих малярийных паразитов или использовании меченных флуоресцеином антител к P. falciparum , ограничивались потребность в сложном аппарате, отсутствие чувствительности и неспособность отличить активную инфекцию от предшествующей. Новые иммунохроматографические тесты захвата антигена способны обнаруживать >100 паразитов/мкл (0.002% паразитемии) и дает быстрые результаты (15–20 мин). Они имеются в продаже в наборах со всеми необходимыми реагентами, а простота выполнения процедур не требует обширного обучения или оборудования для выполнения или интерпретации результатов (53, 63).

ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ

Принцип

Иммунохроматография основана на миграции жидкости через поверхность нитроцеллюлозной мембраны. Иммунохроматографические тесты основаны на захвате антигена паразита из периферической крови с использованием моноклональных антител, приготовленных против антигена-мишени малярии и конъюгированных либо с липосомой, содержащей селеновый краситель, либо с частицами золота в подвижной фазе.Второе или третье захватывающее моноклональное антитело, нанесенное на полоску нитроцеллюлозы, действует как неподвижная фаза. Миграция комплекса антиген-антитело в подвижной фазе вдоль полоски позволяет захватывать меченый антиген моноклональным антителом неподвижной фазы, что приводит к образованию видимой окрашенной линии. Включение захвата меченого козьего антимышиного антитела гарантирует, что система контролирует миграцию (56). Миграция зависит от нескольких физических характеристик входящих в состав реагентов, прежде всего от пористости мембраны, контролирующей скорость потока, и от компонентов буферного раствора, используемого для транспорта меченого комплекса антиген-антитело в лизированной пробе крови (рис.).

Принцип иммунохроматографического ДЭТ на малярию.

Антигены малярии, подходящие в качестве мишеней для быстрых диагностических тестов

Антигены малярии, на которые в настоящее время нацелены БДТ, представляют собой HRP-2, pLDH и альдолазу Plasmodium .

ХРП.

Рок и др. (59) описали, как P. falciparum -инфицированные эритроциты (IRBC) синтезируют три богатых гистидином белка, HRP-1 (HRP-ассоциированный с выступом), HRP-2 и HRP-3. HRP-1 ( M r от 80 000 до 115 000) был идентифицирован во всех положительных на выступ P.falciparum паразитов, но лишь небольшое количество присутствовало в гамбийских изолятах и ​​в нескольких адаптированных к культуре штаммах. HRP-2 ( M r от 60 000 до 105 000) был идентифицирован во всех паразитах P. falciparum , независимо от фенотипа выступа, и был выделен из культуральных супернатантов в виде секретируемого водорастворимого белка. Было показано, что HRP-2 представляет собой экспонированный на поверхности белковый комплекс из нескольких близких полос. HRP-3 ( M r от 40 000 до 55 000) присутствовал в самой низкой численности по сравнению с HRP-1 и HRP-2.Ни HRP-1, ни HRP-2 не были обнаружены в ряде других положительных и отрицательных штаммов малярии, отличной от P. falciparum .

HRP-2 представляет собой водорастворимый белок, продуцируемый бесполыми стадиями и молодыми гаметоцитами P. falciparum (59). Он экспрессируется на поверхности мембран эритроцитов, и из-за его обилия в P. falciparum он был первым антигеном, использованным для разработки ДЭТ для его обнаружения.

pLDH и альдолаза.

pLDH, фермент, присутствующий в гликолитическом пути малярийного паразита, продуцируется половой и бесполой стадиями паразита (44).Различные изомеры pLDH для каждого из четырех Plasmodium spp. инфекции человека существуют, и их обнаружение представляет собой второй подход к разработке ДЭТ. Несколько других ферментов гликолитического пути малярийных паразитов, особенно альдолаза (45), были предложены в качестве антигенов-мишеней для RDT для видов, отличных от P. falciparum .

ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МАССОВЫЕ МАТЕРИАЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ

В настоящее время имеются в продаже наборы для определения антигенов малярии в формате тест-полосок для БДТ.Было проведено множество полевых и лабораторных исследований, в которых иммунохроматографические методы сравниваются с результатами, полученными с помощью обычной микроскопии, флуоресцентной микроскопии и ПЦР (5а, 9, 14а, 16, 21, 22, 23, 23а, 54, 65, 71а, 72).

Анализы для обнаружения HRP-2

Обширные испытания трех коммерческих форматов тест-полосок для обнаружения HRP-2 (ParaSight F [Becton Dickinson, Franklin Lakes, N.J.], ICT Pf или Pf/Pv [Amrad ICT, Сидней, Австралия] и тест PATH Falciparum Malaria IC [PATH, Сиэтл, Вашингтон.]), хотя в настоящее время есть несколько других производителей тестов для HRP-2, для которых нет опубликованных данных.

ParaSight F.

Лабораторные испытания иммунохроматографического теста ParaSight F на HRP-2 для обнаружения P. falciparum в образцах крови показали общую среднюю чувствительность от 77 до 98% при наличии >100 паразитов/мкл. (0,002% паразитемии) со специфичностью от 83 до 98% для P. falciparum по сравнению с микроскопией толстого мазка крови (3, 5a, 11, 35, 36, 57, 64).Более низкий диапазон чувствительности, полученный в различных исследованиях, вероятно, отражает неспособность наблюдателя обнаруживать паразитов при плотности всего 200 паразитов/мкл с помощью микроскопии (многие лаборатории обычно исследуют только 10 полей толстой пленки) или неспособность считывать слабые положительные линии с тест-полоски. Низкий уровень или отсутствие секреции HRP-2 половыми формами может объяснить отрицательные результаты в некоторых случаях (5а).

Исследования Humar et al. (22) и Pieroni et al. (54) исследовали чувствительность и специфичность теста захвата антигена ParaSight F в отношении P.falciparum по сравнению с ПЦР. Они продемонстрировали чувствительность и специфичность теста ParaSight F на уровне 88 и 97% соответственно. Снижение чувствительности свидетельствовало о большей способности ПЦР выявлять низкие уровни паразитемии.

ICT
Pf и PATH Falciparum Malaria IC.

Опыт работы с тест-полосками AMRAD ICT Pf и Falciparum Malaria аналогичен опыту использования теста ParaSight F (16). Миллс и др. (47) сравнили результаты анализов крови 148 зарубежных путешественников с использованием полоски PATH Falciparum Malaria IC Strip, пропитанной иммуноглобулином М (IgM) моноклональным анти-HRP-2, с результатами, полученными с помощью микроскопии и ПЦР.Они получили чувствительность и специфичность 96 и 99% при обнаружении HRP-2 для P. falciparum с противоречивыми результатами, имеющими <100 паразитов/мкл (0,002% паразитемии).

Wongsrichanalai et al. (73) оценили тест ICT Pf для выявления бесполой паразитемии P. falciparum у 551 субъекта в трех группах в Таиланде: (i) пациенты с симптомами, самостоятельно обращающиеся за диагнозом, (ii) жители деревни в скрининговом опросе, и (iii) пациенты, недавно получавшие лечение от P.малярия falciparum . Эталонным стандартом была экспертная световая микроскопия. Они обнаружили, что производительность теста ИКТ была одинаковой для диагностического и скринингового режимов. Были получены четыре вывода: (i) чувствительность теста напрямую коррелирует с плотностью паразитов, (ii) интенсивность тестовой полосы напрямую коррелирует с плотностью паразитов, (iii) устойчивые положительные результаты теста после очистки от паразитов исключают его использование для мониторинга ранних терапевтических ответов, и (iv) ложноотрицательный тест при 18 000 паразитов/мкл не был объяснен.Они пришли к выводу, что сильный положительный результат ICT-теста является высокопрогнозирующим фактором бесполой паразитемии P. falciparum для диагностики новых случаев малярии P. falciparum в Таиланде, но отрицательный результат теста недостаточен для исключения паразитемии <300 паразитов/ мкл (0,006% паразитемия), а в некоторых случаях даже более высокая паразитемия.

Самодиагностика.

Наборы для самодиагностики для путешественников в отдаленных районах получили поддержку. Пациенты с симптомами в возрасте от 16 до 60 лет, обратившиеся в Больницу тропических болезней в Лондоне, Соединенное Королевство, в период с сентября 1997 г. по июль 1999 г. с просьбой пройти тестирование на малярию, были приглашены принять участие в исследовании по самодиагностике малярии; Всего в исследование было включено 153 пациента.Использовали малярийные карточки ICT Pf . Уитти и др. сообщили, что результаты тестов пациентов сравнивали с микроскопией (толстые и тонкие мазки крови) (71a). Из пациентов 115 (75%) указали, что инструкции легко выполнять, а 128 (84%) сказали, что тесты легко читать. Из 16 неудач, приведших к недействительным тестам, 4 пациента не смогли использовать ланцет, 3 получили недостаточное количество крови, 4 не смогли прочитать карту, 1 забыл добавить реагент, а остальные назвали различные причины неудачи.По сравнению с микроскопией специфичность и чувствительность самотестирования составили 97 и 95% соответственно. Хотя эти результаты являются обнадеживающими, технические проблемы и чувствительность тестов необходимо решать с помощью дополнительных полевых испытаний. В настоящее время эта технология не заменит скорейшего обращения за надлежащей медицинской помощью при подозрении на малярию (71a).

Применение формата карт ICT Pf и Pf/Pv (рис. ) в целом оказалось более удобным для пользователя, чем тесты, требующие нескольких этапов или использующие лунку, содержащую конъюгированное антитело, в которую помещают полоску. .Совсем недавно использование кассетного формата обеспечило более удовлетворительное устройство с точки зрения безопасности и манипуляций.

Иммунохроматографический тестер Amrad ICT Pf для обнаружения P. falciparum HRP-2.

Ограничения.

Хотя иммунохроматографические тесты на основе HRP-2 позволяют быстро диагностировать малярию P. falciparum , их клиническая полезность для диагностики других Plasmodium spp. и для мониторинга терапевтического ответа ограничено.Поскольку HPR-2 экспрессируется только P. falciparum , эти тесты дадут отрицательные результаты с образцами, содержащими только P. vivax, P. ovale или P. malariae ; поэтому многие случаи малярии, отличной от falciparum , могут быть ошибочно диагностированы как малярийно-отрицательные. Увеличение числа географических районов, где P. falciparum является доминирующим или единственным присутствующим видом, особенно с его опасным для жизни потенциалом, имеет большое значение и делает разработку тестов для этого паразита наиболее важной.Однако осознание экономической важности других видов для стран, где они являются эндемичными, и другие последствия, такие как завоз малярии в районы, где инфекция не является эндемичной, являются важными вопросами, требующими включения этих паразитов в диагностические исследования.

Персистентность HRP-2

Было показано, что HRP-2 персистирует и обнаруживается после исчезновения клинических симптомов малярии и удаления паразитов из тела хозяина (38, 46).Хумар и др. (22) обнаружили циркулирующий антиген HRP-2 у 68% пролеченных пациентов на 7-й день, а у 27% он все еще присутствовал на 28-й день. Причина персистенции антигена HRP-2 не совсем понятна и может отражать наличие латентных жизнеспособных паразитов (возможно, в результате неудачного лечения или циркулирующих комплексов антиген-антитело) (68). Действие противомалярийной терапии на паразита может влиять на персистенцию HRP-2. Шифф и др. (60) отметили, что у 10% пациентов, получавших Фансидар, антиген HRP-2 определялся на 14-й день.Карбванг и др. (31) также выявили персистирующий антиген HRP-2 во время и после терапии артеметером, признав, что сигнал HRP-2 не имел значения в течение первой недели лечения, но, по-видимому, был точным индикатором неэффективности лечения в полевых условиях, когда он был обнаружен на 14-й день после лечения.

Паразитемии низкого уровня, наблюдаемые в районах эндемичной инфекции из-за постоянного контакта с малярийными паразитами, могут привести к положительным результатам с сомнительной клинической значимостью (67).Кроме того, есть доказательства того, что у некоторых людей действительно может быть делеция гена, ответственного за выработку HRP-2, и поэтому эти тесты никогда не дадут положительного результата.

Другие ограничения тестов на этот антиген связаны конкретно с техническими аспектами тест-системы HRP-2. Было сделано несколько сообщений о том, что моноклональные антитела IgG, используемые в ParaSight F, перекрестно реагируют с сывороточным ревматоидным фактором, вызывая ложноположительные результаты (25, 38). В тестах Amrad ICT Pf и PATH Falciparum Malaria используются моноклональные антитела IgM, а сообщения о ложноположительных реакциях на ревматоидный фактор встречаются реже (26).

Анализы для обнаружения pLDH

pLDH представляет собой растворимый гликолитический фермент, экспрессируемый на высоких уровнях в бесполых стадиях малярийных паразитов. Он был обнаружен у всех четырех видов малярии человека (55, 56). Активность pLDH коррелирует с уровнем паразитемии, обнаруженным в культурах малярии in vitro и в плазме инфицированных пациентов, что определяется при микроскопии (42, 43, 49, 56).

Специфическое измерение pLDH из Plasmodium spp. в присутствии человека-хозяина ЛДГ можно измерить, используя субстрат 3-ацетилпиридин-адениндинуклеотид (APAD), аналог NAD, в анализе иммунозахвата (анализ IC) (55).Хотя константы Михаэлиса-Ментен аналогичны, число оборотов pLDH в присутствии APAD намного выше, чем у человеческого фермента с тем же кофактором (19). Эта характеристика частично обусловлена ​​конформационными изменениями, происходящими в ферменте, который участвует в лимитирующей стадии реакции окисления-восстановления (13, 18). Пайпер и др. (55) первоначально сравнили использование двух диагностических тестов, основанных на специфическом обнаружении активности pLDH. Анализ ICpLDH выявил фермент в крови во влажном анализе с использованием APAD в качестве субстрата.Авторы подчеркнули важность результатов, показывающих, что активность pLDH была обнаружена у жизнеспособных половых и бесполых паразитов инфекций P. falciparum и P. vivax .

ОПТИМАЛ.

Панель моноклональных антител, которые могут связываться с активной pLDH, была получена из инфицированных P. falciparum эритроцитов. Три из этих моноклональных антител используются в иммунохроматографическом тесте с полосками RDT (OptiMAL; Flow Inc., Портленд, штат Орегон). Два моноклональных антитела являются панспецифичными и распознают все четыре вида малярии; третье моноклональное антитело специфично только к P.falciparum ЛДГ. Одно панспецифическое антитело (6C9), конъюгированное с частицами золота в качестве индикатора, используется для захвата всего малярийного антигена pLDH, присутствующего в образце крови. Два других моноклональных антитела действуют как отдельные иммобилизованные сайты захвата на иммунохроматографической полоске. Одно из моноклональных антител (17E4) специфично для захвата pLDH P. falciparum , а другое (19G7) является панспецифическим антителом pLDH. Комплекс малярийный антиген/меченое антитело будет захватываться одним или обоими иммобилизованными линии захвата ( стр.falciparum spp.) или только панспецифической линией (не P. falciparum spp.). Комплекс антиген-антитело, конъюгированный с золотом, строится в виде фиолетовой линии на полосе захвата. Наличие контрольной линии захвата козьего моноклонального антитела против мыши указывает на успешный тест. При наличии смешанных инфекций P. falciparum и видов, отличных от falciparum, результаты будут указывать на P. falciparum (рис. ). Моноклональные антитела, используемые в тесте OptiMAL, были тщательно протестированы на перекрестную реактивность с ЛДГ из других простейших крови, таких как Leishmania, Babesia , и патогенных бактерий или грибков; доказательств такой перекрестной реактивности обнаружено не было (42)

Иммунохроматографический тест-прибор OptiMAL для обнаружения pLDH.

Клинические испытания с использованием OptiMAL проводились во многих центрах (14a, 23, 23a, 24, 27, 41, 49, 50, 51, 52, 56, 58). Следует отметить, что в нескольких исследованиях было показано, что снижение активности pLDH параллельно снижению жизнеспособных паразитов во время терапии (42, 49, 50, 56). Таким образом, этот анализ можно использовать для мониторинга прогресса пациента во время терапии и служит показателем рецидива и возможных лекарственно-устойчивых инфекций, предполагая, что уровни pLDH сохраняются в этих условиях.

Палмер и др. (51) исследовали способность OptiMAL обнаруживать P. vivax и P. falciparum во время вспышки малярии в Гондурасе. Результаты, полученные с помощью тестов OptiMAL, сравнивали с результатами, полученными с окрашенными по Гимза толстыми мазками крови из того же образца. Образцы цельной крови были получены от 202 пациентов с подозрением на малярию; 96 (48%) образцов были положительными при микроскопическом исследовании и 91 (45%) были положительными при тесте OptiMAL.Было обнаружено, что из пленок, положительных при микроскопии, 82% содержали паразитов P. vivax и 18% содержали P. falciparum . OptiMAL обнаружил P. vivax и P. falciparum в 81 и 19% положительных случаев соответственно. Общая чувствительность, полученная с помощью теста OptiMAL для P. falciparum и P. vivax в этой серии, составила 94 и 88% соответственно при специфичности 100 и 99% соответственно. Образцы, признанные положительными с помощью микроскопии, но отрицательными с помощью OptiMAL (3%), имели <100 паразитов/мкл крови (0.002% паразитемия).

В другом полевом исследовании пациентов больниц с симптомами и бессимптомных добровольцев, проведенном Quitana et al. (58) у госпитализированных пациентов паразитов P. falciparum и P. vivax были обнаружены с помощью толстопленочной микроскопии и ПЦР со средней плотностью паразитов 590/мм 3 . Когда результаты тест-полосок OptiMAL для тех же образцов сравнивали с результатами, полученными с помощью микроскопии и ПЦР, OptiMAL имел чувствительность 100% и специфичность 95% для образцов, содержащих P.фальципарум . Хотя чувствительность и специфичность тест-полоски в этом исследовании были аналогичны чувствительности и специфичности толстопленочной микроскопии для P. vivax , по сравнению с ПЦР тест с полоской не смог правильно идентифицировать смешанные инфекции из-за общего захвата, полученного с панспецифическим тестом. полоса антител.

Дальнейшие исследования в Индии John et al. (28) и в Гамбии Hunt-Cooke et al. (23) с P. falciparum и P. vivax -положительные образцы из когорты полуиммунных лиц, подвергшихся воздействию малярии, подтвердили чувствительность и специфичность, обнаруженные другими исследователями для OptiMAL.Икбал и др. (24) изучали обнаружение pLDH в сравнении с микроскопией и ПЦР у 550 иммигрантов из эндемичных по малярии районов, которые въезжали в Кувейт, где малярия не является эндемичной. Они пришли к выводу, что при уровне паразитов >100 паразитов/мкл (0,002% паразитемии) чувствительность, полученная для OptiMAL, составила 97%. Однако, поскольку половина образцов с <50 паразитов/мкл (0,001% паразитемии), обнаруженных при микроскопии, не были обнаружены, авторы рекомендовали использовать тест с большой осторожностью и не заменять обычную микроскопию при диагностике малярии.В другом исследовании, проведенном Iqbal et al., производительность анализа pLDH была сравнима с микроскопией для обнаружения инфекции P. falciparum при паразитемии >100/мкл. Анализ pLDH имеет преимущество перед анализом ICT Pf для HRP-2, поскольку образцы, инфицированные P. vivax , легко отличить от инфицированных P. falciparum ; Также могут быть обнаружены смешанные инфекции как P. falciparum , так и P. vivax (23a).Однако исследование мазка крови остается стандартным методом диагностики малярии, поскольку оно выявляет все Plasmodium spp. и позволяет визуализировать стадии роста паразита, что необходимо для принятия терапевтических решений.

Елинек и др. (27) в многоцентровом исследовании 231 пациента, обследованного на малярию с использованием тест-полосок для HRP-2 и pLDH, было обнаружено, что 53 пациента дали положительные результаты на инфекции P. falciparum . На основании полученных специфичности и чувствительности они пришли к выводу, что тест-полоски могут повысить конкретную точность диагностики P.falciparum малярии, если задействованы неспециализированные лаборатории. Муди и др. (49), исследуя возможность замены микроскопического исследования рутинных мазков крови на наличие малярийных паразитов методом OptiMAL в исследовании когорты пациентов, путешествующих по всему миру, получили гораздо более низкую чувствительность к малярии, отличной от P. falciparum , отличной от . P. vivax (таблица).

ТАБЛИЦА 1.

Результаты обычного микроскопического исследования образцов крови на малярию в сравнении с экспресс-тестом OptiMAL с полоскамиобразцы и видов, присутствующих с помощью микроскопии + No. Optimal положительных + Чувствительности (%) малярийного плазмодия 54 с паразитемией> 1% (50000 паразитов / мкл) 54 100 103 с паразитемией 0,1–1% (5000 паразитов/мкл) 103 100 72 с ParasiTemia из 0,01–09088 72 с ParasiTemia из 0,01–09088 72 с Parasitemia из 0,01–01088 72. 100     32 с паразитемией 0.001-0.009% (50 паразитов / мкл) 23 72 11 с паразитемии от 0.0001-0.0009% (5 паразитов / мкл) 8 73 5 с гаметоцитов только 4 80 Plasmodium трехдневной 110 (все бесполые стадии) 105 96 плазмодий malariae 17 (поздний трофозоиты) 8 47 Отрицательные 214 (паразиты не малярии найден) 0 100

В исследовании анализа оптимальны для обнаружения и идентификации инфекций малярии у бессимптомных жителей Индонезии, Fryauff et al (14a) обнаружили чувствительность от 88 до 92% для выявления инфекций от 500 до 1000 паразитов/мкл, а диапазон, охватывающий среднюю паразитемию первичной симптоматической P.falciparum среди индонезийских трансмигрантов, ранее не болевших малярией. Однако эта система была заметно менее чувствительна, чем экспертная микроскопия, для различения видов малярии.

Несколько исследователей отметили, что во время терапии удаление паразитов из мазков крови и снижение уровня pLDH идут параллельно (49, 50, 65). Муди и др. (49) наблюдали за этим событием у 60 пациентов, проходящих лечение от P. falciparum в Больнице тропических болезней, Лондон, Соединенное Королевство, и отметили, что образцы, положительные по OptiMAL, соответствовали ежедневному снижению паразитемии, наблюдаемому при микроскопии (таблица).

Таблица 2.

Результаты, полученные с помощью микроскопии и оптимальных из последовательных образцов крови от 60 пациентов, получающих терапию для P. falciparum Малярия A

Время сбора образцов
. Сборка выборки
. микроскопическое паразитемия Среднее паразитемия (%) Нет (%) OPTIMAL положительный Чувствительность (%) оПТИМАЛЬНОГО при этом паразитемия из исходных образцов
День диагностики (предварительная обработка) 60 2.43 58 (98) 100
1 день после лечения 51 1,96 39 (76) 100
2-й день после лечения 44 0,525 27 (61 ) 100
3-й день после лечения 29 0,11 18 (62) 100
4-й день после лечения 16 0,031 11 (68) 100
День 5 после лечения 8 0.0022 3 (38) 72

Шринивасан и др. (65) наблюдали за течением 17 пациентов с P. falciparum , которые проходили лечение хинином, противомалярийным препаратом, который поражает мембрану паразита, с использованием родамина-123 (R123), красителя, ранее использовавшегося для демонстрации жизнеспособности паразита в культурах vitro (26, 66). R123 представляет собой катионный проникающий краситель, который избирательно накапливается внутри малярийного паразита благодаря его высокому мембранному потенциалу (внутренний отрицательный), который поддерживается электрогенным насосом H + -ATPase, расположенным в мембране.Таким образом, R123 является жизненно важным красителем, окрашивающим только жизнеспособных паразитов. Они смогли продемонстрировать постоянное присутствие циркулирующих, но нежизнеспособных паразитов и пришли к выводу, что эти паразиты могут способствовать длительной микроскопической паразитемии, выходящей за рамки очевидного клинического излечения. Это говорит в пользу возможного использования тестов, измеряющих pLDH, в качестве ценных инструментов для мониторинга противомалярийной терапии (14a, 49, 50, 56), особенно в областях, где микроскопическое исследование может быть недоступно.

ДРУГИЕ ФЕРМЕНТЫ-КАНДИДАТЫ, КОТОРЫЕ МОГУТ ИСПОЛЬЗОВАТЬ В КАЧЕСТВЕ ИНДИКАТОРОВ ИНФЕКЦИИ

Альдолаза

Другие ферменты гликолитического пути малярийного паразита были признаны и рассматриваются в качестве мишеней для экспресс-тестов диагностики малярии.В энергетическом обмене кровяных стадий малярии человека отсутствует функциональный цикл лимонной кислоты, а образование АТФ полностью зависит от гликолитического цикла. Альдолаза является ключевым ферментом в этом пути. В эксперименте по изучению стадийно-специфической экспрессии изоферментов альдолазы у малярийного паразита грызунов Plasmodium berghei Meier et al. (45) клонировали два гена, кодирующие гликолитический фермент альдолазу (aldo-1 и aldo-2). Было обнаружено, что aldo-1 практически идентичен альдолазе P. falciparum , тогда как aldo-2 имеет 13% разнообразие последовательностей.Зонды со специфическими антителами смогли обнаружить альдо-1 на стадии спорозоитов и альдо-2 на бесполых стадиях малярийных паразитов, обнаруженных в крови.

Моноклональные антитела, полученные против альдолазы Plasmodium , являются панспецифичными по своей реакции и использовались в комбинированном тесте с HRP-2 для обнаружения P. vivax , а также P. falciparum в крови. Титра и др. (67) оценили комбинированный иммунохроматографический тест Pf/Pv (ICT Pf/Pv ), форматированный полосами захвата как для HRP-2, так и для альдолазы.Они сообщили, что специфичность и отрицательное прогностическое значение для диагноза P. vivax составили 94,8 и 98,2% соответственно. Общая чувствительность 75% и положительная прогностическая ценность 50% для P. vivax малярии были ниже, чем хотелось бы в их ситуации. Чувствительность, полученная для >500 паразитов/мкл (0,01% паразитемии), составила 96%, а для значений ниже этого уровня — только 29%.

В исследовании 13 пациентов с малярией в Брисбене, Австралия, с использованием теста ICT Pf/Pv Eisen и Saul (14) также отметили низкую чувствительность обнаружения P.vivax , когда количество паразитов было ниже 500 паразитов/мкл (0,01% паразитемии). Они продемонстрировали снижение интенсивности панспецифической линии при инфекции P. falciparum или P. vivax во время лечения, в отличие от линии HRP-2, которая оставалась положительной в течение значительного периода времени после того, как микроскопия стала отрицательной. Авторы предполагают возможность использования панспецифической линии для мониторинга ответа на терапию. Однако было представлено мало доказательств чувствительности панспецифического антитела ICT Pf/Pv к P.falciparum , поскольку эта серия показала обнаружение >100 паразитов (0,002% паразитемии) в трех образцах, но не в пяти других с более высоким количеством паразитов.

ОБСУЖДЕНИЕ

Рекомендуемый метод и текущий золотой стандарт, используемый для рутинной лабораторной диагностики малярии, — это микроскопическое исследование окрашенных тонких и толстых мазков крови, особенно с дополнительной чувствительностью, обеспечиваемой исследованием толстых мазков крови. В самых умелых руках можно ожидать, что этот метод обнаружит 50 паразитов/мкл (0.001% parasitemia) и идентифицировать до видового уровня 98% всех обнаруженных паразитов. Эта процедура признана сложной и трудоемкой, требующей значительной подготовки для получения необходимых навыков. В последние несколько лет попытки заменить традиционное, но утомительное чтение мазков крови привели к методам обнаружения малярийных паразитов, которые дают чувствительность, эквивалентную или лучшую, чем у микроскопии. Методы с использованием флуоресцентной микроскопии помогли улучшить чувствительность, но не специфичность.ПЦР оказалась чувствительным методом диагностики всех четырех видов малярийных паразитов человека, и можно ожидать, что она превысит чувствительность микроскопического исследования. Обнаружение менее 5 паразитов/мкл и идентификация на уровне видов делают этот метод отличным для сравнения чувствительности и специфичности других немикроскопических методов. Однако ПЦР является непрактичным стандартом для измерения рутинной диагностики острой малярии из-за требуемого времени и технического опыта.Обнаружение ДНК в образцах, взятых в периоды, когда инфекция была удалена от инфекции (28), может дать сбивающие с толку доказательства рецидива или лекарственной устойчивости.

Иммунохроматографические тест-полоски позволяют использовать более быстрые немикроскопические методы диагностики малярии, что позволяет сэкономить время и время на обучение. Эти тесты просты в выполнении и требуют небольшой подготовки для интерпретации результатов. Однако существует ряд вопросов, на которые в документе ВОЗ «Новые перспективы диагностики малярии» обращается внимание при рассмотрении текущего состояния разработки ДЭТ для малярии.Они обсуждаются ниже.

Чувствительность к ДЭТ остается проблемой, особенно для неиммунных групп населения. Плотность паразитов выше 100 паразитов/мкл (0,002% паразитемии) должна быть определена с уверенностью (средняя паразитемия, наблюдаемая у пациентов, посещающих Больницу тропических болезней, составляет от 5000 паразитов/мкл [0,1% паразитемии] до 50 паразитов/мкл [0,001% паразитемии]. ]). Хотя эта чувствительность является разумной целью, которую можно ожидать от измерительных полосок для диагностики P. falciparum , она находится на нижнем пределе возможностей большинства устройств, использующих методы захвата HRP-2 или pLDH.Доступные тестовые устройства для выявления малярии, отличной от P. falciparum (ICT Pf/Pv и OptiMAL), имеют чувствительность для диагностики P. vivax от 90 до 96% (OptiMAL) и от 75 до 95% (ICT). Pf/Pv ). Уровни паразитемии, встречающиеся для этого паразита, редко превышают 1%, и обычно встречаются гораздо более низкие цифры.

Отчеты об обнаружении антигена P. ovale и P. malariae (49) указывают на то, что панспецифические моноклональные антитела вырабатываются из P.falciparum в OptiMAL имеют более низкое сродство к этим антигенам, с дополнительной проблемой, заключающейся в том, что встречается меньше паразитов, чем для P. vivax . Возможно, существует несколько изомеров этих паразитов, что объясняет некоторые неудачи обнаружения. Можно предвидеть, что для улучшения обнаружения могут быть доступны более чувствительные моноклональные антитела для захвата P. ovale (M.T. Makler, Flow Inc., личное сообщение). Дайер и др. (12) сообщают о неспособности антител к панмалярии иммунохроматографического теста ICT Pf/Pv обнаружить симптоматический P.malariae в Восточном Тиморе и Папуа-Новой Гвинее даже при паразитемии 4080 паразитов/мкл. Отсутствуют сообщения об опыте использования этого формата теста для P. ovale .

Важно клиническое и эпидемиологическое значение тест-полосок, распознающих гаметоциты Plasmodium . В районах, где малярия не передается, тот факт, что тест не обнаружит все гаметоциты, имеет меньшее значение, чем в районах с высоким уровнем передачи. HRP-2 из половых стадий P.falciparum выявляется легче, чем pLDH, которая проявляет активность в молодых формах, но не так легко в более поздних.

Отрицательный результат ДЭТ в настоящее время не может быть принят за чистую монету и должен быть подтвержден микроскопическим исследованием. Была постулирована возможность изолятов с делецией гена, которые не экспрессируют HRP-2, хотя такие же доказательства для pLDH еще не обнаружены. Следует рассмотреть вопрос о дальнейшем исследовании этих и других невыраженных антигенов.

Несколько исследователей сообщают о полезности ДЭТ как средства наблюдения за течением паразитемии во время терапии (49, 50).Шринивасан и др. (65) исследовали значение паразитов, которые остаются в периферической крови после нескольких дней терапии, обнаруженных при микроскопии. Когда используется катионный краситель R123, требующий интактной мембраны, обнаруживаемой у жизнеспособных паразитов, краситель проникает через мембрану и окрашивает паразита. Это исследование пришло к выводу, что микроскопически наблюдаемые паразиты, оставшиеся в конце курса терапии, являются нежизнеспособными паразитами, лишенными активности фермента pLDH, но еще не очищенными от крови.Это может повлиять на интерпретацию различных характеристик различных методов РДТ в сравнении с микроскопией как золотым стандартом, когда во время лечения берутся последовательные образцы. Сохранение антигенемии HRP-2 после устранения периферической паразитемии в некоторых случаях снижает полезность этих анализов для мониторинга ответа на терапию.

Несмотря на то, что несколько исследователей сообщают о количественных или полуколичественных данных от форматированного в настоящее время БДТ, в настоящее время невозможно получить показания на глаз, которые являются линейными для паразитемии, без какой-либо формы считывателя захваченных антител, конъюгированных с золотом.Количественное измерение позволит провести прогностическую оценку и предоставит информацию, указывающую на лекарственную устойчивость. Представленные в настоящее время на рынке RDT просты в использовании; большинство из них имеют кассетный формат с однократными областями применения для образца крови и очищающего буфера. Большинство оценочных испытаний включали температурную и временную стабильность в течение не менее 1 года при 40°C. В настоящее время ни один из коммерческих форматов не имеет производства, одобренного Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) в Соединенных Штатах, поскольку наиболее острой потребностью во время их разработки было использование в странах с ограниченными ресурсами.Однако, особенно с версиями, обнаруживающими малярию, отличную от P. falciparum (ICT Pf/Pv и OptiMAL), военные США провели одобренные FDA испытания из-за возможного использования этих устройств в полевых условиях. Окончательные договоренности о производстве в Соединенных Штатах могут быть возможны в будущем. Коммерческий интерес к производству измерительных щупов по цене, которую могут себе позволить многие более бедные страны, является предметом постоянных дискуссий, и даже при дифференцированных ценах для разных стран добиться более низкой требуемой стоимости будет трудно.Производство RDT в настоящее время находится на рассмотрении крупных компаний (AMRAD ICT и Becton Dickinson), и в ближайшем будущем можно ожидать возможных коммерческих изменений.

Новое поколение ДЭТ предлагает реальный практический шанс перенести диагностику малярии из лаборатории и ближе к пациенту. Чувствительность >100 паразитов/мкл (0,002% паразитемия), достигаемая для диагностики P. falciparum как для анализа HRP-2, так и для анализа на основе ферментов, настолько хороша, что большинство сотрудников клинических лабораторий в неспециализированных лабораториях могли бы ожидать достижения при микроскопии с ограниченным воздействием. на случаи малярии (47).Приветствуется дополнительная гарантия того, что опасная для жизни паразитемия с P. falciparum не будет упущена, особенно для неопытных сотрудников лаборатории во время ночных вызовов. Способность выявлять большинство случаев малярии, не относящихся к falciparum , также делает эти тесты идеально подходящими в качестве основных резервных процедур для диагностики малярии.

При рассмотрении методов лабораторной диагностики малярии (таблица ) необходимо учитывать множество соображений, не последними из которых являются важные факторы доступности и стоимости.Нынешние дебаты о внедрении тестов на основе новой технологии приветствуются. Тем не менее, это не избавляет от необходимости просмотра правильно окрашенных толстых и тонких мазков крови в качестве стандартной операционной процедуры при подозрении на малярию или замены текущей программы обучения для идентификации видов Plasmodium и для обнаружения паразитемии ниже настоящего уровня. порог обнаружения РДТ.

Таблица 3.

Сравнение методов диагностики Plasmodium инфекции в крови

Все виды 9 0635 Умеренная
Параметр Микроскопия ПЦР Флуоресцентный Щуп ПХ-2 Щуп pLDH, ИКТ Pf / Pv
Чувствительность паразитов / мкл) 50 5 50 > 100 > 100
Специфичность Все виды П.фальципарум хорошо, другие трудно П. трехдневный только П. трехдневный и П. трехдневный хорошо, и П. овальных и P. malariae только с pLDH
плотности Паразита или паразитемия Да Нет Нет Сырая оценка Сырая оценка
Время для результата 30-60 мин 24 ч 30-60 мин 20 мин 20 мин
уровень мастерства High High Умеренный Low Low
оборудование микроскоп PCR аппарат QBC аппарат или прямой флуоресцентный микроскоп Kit только Kit только
Стоимость/тест Низкий Высокий Умеренный/низкий Умеренный

ЛИТЕРАТУРА

1. Бэрд, Дж. К., Пурномо и Т. Р. Джонс. 1992. Диагностика малярии в полевых условиях с помощью флуоресцентной микроскопии капилляров QBC. Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 86 : 3–5. [PubMed] [Google Scholar]2. Баркер, Р. Х., Н. Т. Банчонгаксорм, М. М. Курваль, В. Сувонкерд, К. Римвунгтрагун и Д. Р. Вирт. 1992. Простой метод обнаружения инфекции Plasmodium falciparum у пациентов: сравнение метода ДНК-зонда с микроскопической диагностикой.Являюсь. Дж. Троп. Мед. Гиг. 41 : 266–272. [PubMed] [Google Scholar]3. Beadle, C., G.W. Long, W.R. Weiss, P.D. Meelroy, S.M. Maret, A.J. Oloo и S.L. Hoffman. 1994. Диагностика малярии путем обнаружения антигена Plasmodium falciparum HRP-2 с помощью экспресс-анализа с захватом полосками. Ланцет, я : 564-568. [PubMed] [Google Scholar]4. Бенито А., Дж. Роше, Р. А. Молина, К. Амела и Дж. Алтар. 1994. Применение и оценка диагностики малярии QBC® в голоэндемическом районе.заявл. Паразитол. 35 : 266–272. [PubMed] [Google Scholar]5. Bosch, I., C. Bracho, and H.A. Perez. 1996. Диагностика малярии с помощью флуоресцентной микроскопии с акридиновым оранжевым в эндемичном районе Венесуэлы. Мем. Инст. Освальдо Круз 91 : 83–86. [PubMed] [Google Scholar]5a. Бренье-Пиншар, М. П., К. Пинель, А. Круазонье, Дж. П. Брион, О. Фор, Д. Понар и П. Амбруаз-Томас. 2000. Диагностика малярии в неэндемичных странах с помощью теста Parasight-F.Являюсь. Дж. Троп. Мед. Гиг. 63 : 150–152. [PubMed] [Google Scholar]6. Клендеман, Т. Е., Г. В. Лонг и Дж. К. Бэрд. 1995. Толстые мазки крови, окрашенные QBC® и Гимза: диагностические возможности лабораторных технологов. Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 86 : 378. [PubMed] [Google Scholar]7. Кук, А. Х., А. Х. Муди, К. Лемон, П. Л. Чиодини и Дж. Хортон. 1992. Использование флуорохрома бензотиокарбоксипурина в диагностике малярии. Транс. Р. Соц. Троп. Мед.Гиг. 87 : 549. [PubMed] [Google Scholar]8. Кук, А. Х., С. Моррис-Джонс, Дж. Хортон, Б. М. Гринвуд, А. Х. Муди и П. Л. Чиодини. 1993 г. Оценка бензотиокарбоксипурина для диагностики малярии в эндемичных районах. Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 87 : 549. [PubMed] [Google Scholar]9. Крейг М. и Б. Л. Шарп. 1997. Сравнительная оценка четырех методов диагностики инфекций Plasmodium . Транс. Р. Соц. Троп. Мед.Гиг. 91 : 279–282. [PubMed] [Google Scholar] 10. Делаколлетт Д. и П. Ван дер Стейфт. 1994 г. Прямое окрашивание акридиновым оранжевым не является «чудесным» решением проблем диагностики малярии в полевых условиях. Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 88 : 187–188. [PubMed] [Google Scholar] 11. Дитц, Р., М. Перкинс, М. Булос, Ф. Лус, Б. Реллер и К. Р. Кори. 1995. Диагностика Plasmodium с помощью новой системы обнаружения антигена. Являюсь. Дж. Троп. Мед.Гиг. 52 : 45–59. [PubMed] [Google Scholar] 12. Дайер, М., Э., Э. Титра, Б. Дж. Карри и Н. М. Ансти. 2000. Неспособность «панмалярийных» антител иммунохроматографического теста ICT® Malaria Pf/Pv выявить симптоматическую инфекцию Plasmodium malariae . Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 94 : 518. [PubMed] [Google Scholar]13. Dunn, C.R., MJ Banfield, JJ Barker, CW Hinham, KM Moreton, DT Balik, RL Brady и JJ Holbrook. 1996. Структура лактатдегидрогеназы из Plasmodium falciparum открывает новую мишень для разработки противомалярийных препаратов. Нац. Структура биол. 3 : 912–915. [PubMed] [Google Scholar] 14. Эйзен, Д. П. и А. Сол. 2000. Исчезновение панмалярийной антигенной реактивности с использованием набора ICT Malaria Pf/Pv происходит параллельно с уменьшением выраженной паразитемии, как показывает микроскопия. Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 94 : 169–170. [PubMed] [Google Scholar] 14a. Фряуфф, Д. Дж., Пурномо, М. А. Сутамихарджа, И. Р. С. Эльязар, И. Сусанти, Крисин, Б. Субианто и Х. Марвото. 2000. Выполнение оптимального анализа для обнаружения и идентификации малярийных инфекций у бессимптомных жителей Ириан Джая, Индонезия. Являюсь. Дж. Троп. Мед. Гиг. 63 : 139–145. [PubMed] [Google Scholar] 15. Гей Ф., Б. Траоре, Дж. Занони, М. Данис и М. Джентилини. 1996. Прямое флуоресцентное исследование мазков крови акридиновым оранжевым по сравнению с современными методами диагностики малярии.Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 90 : 516–518. [PubMed] [Google Scholar] 16. Гэй О., М. Диуф и С. Диалло. 1999. Сравнение толстых пленок, QBC малярии, ПЦР и тест-полоски PATH falciparum малярии в диагностике Plasmodium falciparum . Паразит 6 : 273–275. [PubMed] [Google Scholar]

17. Gilles, H. 1993 . Методы диагностики малярии, стр.78. В Х. М. Жиль и Д. А. Уоррелл (ред.), Основная маляриология, 3-е изд.П. Эдвард Арнольд, Лондон, Великобритания.

18. Gomez, M.S., R.C. Piper, L. Hunsiker, and D. Vander Jagt. 1997. Специфичность субстрата и кофактора и селективное ингибирование лактатдегидрогеназы малярийного паразита Plasmodium falciparum . Мол. Биохим. Паразитол. 90 : 235–246. [PubMed] [Google Scholar] 19. Hanscheid, T. 1999. Диагностика малярии: обзор альтернатив традиционной микроскопии. клин. лаборатория Гематол. 21 : 235–245.[PubMed] [Google Scholar] 20. Хаким, С. Л., Т. Фурута, А. Н. Рейн, Ю. Нормазна, М. Р. Замри, С. Кодзима и Дж. В. Мак. 1993 г. Диагностика малярии с помощью светового микроскопа с интерференционным фильтром для диагностики малярии. Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 56 : 44–48. [Google Академия] 21. Хинд, М., М. Агабани, И. А. Эль Хаг, И. А. Эль Тум, М. Сатти и А. М. Эль Хассан. 1994. Флуоресцентная микроскопия с использованием светового микроскопа с интерференционным фильтром для диагностики малярии.Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 88 : 61. [PubMed] [Google Scholar]22. Хумар А., К. Орт, М. А. Харрингтон, Д. Пиллаи и К. К. Кейн. 1997. Тест ParaSight® F в сравнении с полимеразной цепной реакцией и микроскопией для диагностики малярии Plasmodium falciparum у путешественников. Являюсь. Дж. Троп. Мед. Гиг. 56 : 44–48. [PubMed] [Google Scholar] 23. Хант-Кук, А. Х., П. Л. Чиодини, Т. Дочерти, А. Х. Муди, Дж. Райс и М. Пиндер. 1999.Сравнение иммунохроматографического анализа обнаружения антигена на основе лактатдегидрогеназы паразита (OptiMAL®) с микроскопией для обнаружения малярийных паразитов в образцах крови человека. Являюсь. Дж. Троп. Мед. Гиг. 60 : 20–23. [PubMed] [Google Scholar] 23a. Икбал, Дж., П. Р. Хира, А. Шер и А. А. Аль-Энези. 2001. Диагностика завозной малярии с помощью анализов иммунозахвата на основе лактатдегидрогеназы (pLDH) Plasmodium и богатого гистидином белка 2 (PfHRP-2). Являюсь. Дж. Троп.Мед. Гиг. 64 : 20–23. [PubMed] [Google Scholar] 24. Икбал, Дж., А. Шер, П. Р. Хира и Р. Аль-Овайш. 1999. Сравнение теста OptiMAL® с ПЦР для диагностики малярии у иммигрантов. Дж. Клин. микробиол. 39 : 3644–3646. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]25. Икбал, Дж., А. Шер и А. Раб. 2000. Plasmodium falciparum Диагностический анализ иммунозахвата на основе богатого гистидином белка-2 малярии: перекрестная реактивность с ревматоидными факторами.Дж. Клин. микробиол. 38 : 1184–1186. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]26. Идзумо, А., К. Танабэ и М. Като. 1987. Способ контроля жизнеспособности малярийных паразитов ( Plasmodium yoelii ), выделенных из эритроцитов хозяина. Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 81 : 264–267. [PubMed] [Google Scholar] 27. Елинек Т., М. П. Гробуш, С. Швенке, С. Штейдл, Ф. Н. Э. фон Зонненбург и Т. Лошер. 1999. Чувствительность и специфичность тест-полосок для экспресс-диагностики у неиммунных путешественников.Дж. Клин. микробиол. 37 : 721–723. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]28. Джон, С. М., А. Сундарсанам, У. Ситарам и А. Х. Муди. 1998. Оценка OptiMAL®, тест-полоски для диагностики малярии. Анна. Троп. Мед. Паразитол. 92 : 621–622. [PubMed] [Google Scholar] 29. Каин, К. С., А. Э. Браун, Л. Мирабелли и Х. К. Вебстер. 1993. Обнаружение Plasmodium vivax с помощью полимеразной цепной реакции в полевых исследованиях. Дж. Заразить.Дис. 168 : 1323–1326. [PubMed] [Google Scholar] 30. Каин, К. К., Д. Э. Кайл, К. Вонгричаналай и А. Э. Браун. 1994. Качественная и полуколичественная полимеразная цепная реакция для прогнозирования неудачи лечения Plasmodium falciparum . Дж. Заразить. Дис. 170 : 16:26–16:30. [PubMed] [Google Scholar] 31. Карбванг Дж., О. Тасанор, Т. Канда, Ю. Ватанагун, М. Ибрагим, К. Набанчанг, А. Танавибил и В. Рунти. 1996. Тест ParaSight® F для выявления неэффективности лечения малярии с множественной лекарственной устойчивостью Plasmodium falciparum .Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 90 : 513–515. [PubMed] [Google Scholar] 32. Kawamoto, F. 1991. Быстрая диагностика малярии с помощью флуоресцентной микроскопии со световой микроскопией и интерференционными фильтрами. Ланцет i : 200–202. [PubMed] [Google Scholar] 33. Kawamoto, F. 1991. Быстрая диагностика малярии с помощью флуоресцентной микроскопии. Ланцет i : 624–625. [PubMed] [Google Scholar] 34. Кавамото Ф., Х. Мияке, О. Канеко, М. Кимура, Т. Д. Нгуен, К.Луи, М. Чжоу, Д. Д. Ле, С. Каваи, С. Исомура и Ю. Ватая. 1996. Изменение последовательности гена 18S рРНК, мишени для диагностики малярии на основе ПЦР, у Plasmodium ovale из Южного Вьетнама. Дж. Клин. микробиол. 34 : 2287–2289. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]35. Килиан, А. Х. Д., Э. Б. Мугусу, Г. Кабагамбе и Ф. Фон Зонненбург. 1997. Сравнение двух быстрых диагностических тестов на основе HRP-2 для Plasmodium falciparum . Транс.Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 91 : 666–667. [PubMed] [Google Scholar] 36. Kodisinghe, H.M., K.L. Perera, S.D.T. Premawansa, S. Naotunne, A.R. Wickramainghe и K.M. Mendis. 1997. Тест ParaSight® F как рутинный инструмент диагностики малярии в Шри-Ланке. Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 91 : 398–402. [PubMed] [Google Scholar] 37. Конг, Х. Х. и Д. И. Чанг. 1995. Сравнение красителей акридинового оранжевого и Гимзы для диагностики малярии. Корейский Дж. Параситол.33 : 391–394. [PubMed] [Google Scholar] 38. Лафери, Х., К. Кандел и Х. Пихлер. 1997. Ложноположительный тест на малярию с помощью тест-полоски. Н. англ. Дж. Мед. 337 : 1635–1636. [PubMed] [Google Scholar] 39. Лоу, Б. С., Н. Ф. Джеффа, Л. Нью, К. Педерсон, К. Энгбак и К. Марш. 1996. Методы флуоресценции акридиновым оранжевым как альтернатива традиционному окрашиванию по Гимзе для диагностики малярии в развивающихся странах. Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 90 : 34–36.[PubMed] [Google Scholar]40. Маклер, М. Т., Л. К. Рис, Дж. Рис, Р. Дж. Хортон и Д. Дж. Хинрикс. 1991. Обнаружение заражения Plasmodium falciparum флуоресцентным красителем бензотиокарбоксипурином. Являюсь. Дж. Троп. Мед. Гиг. 44 : 11–16. [PubMed] [Google Scholar]41. Маклер, М. Т., С. Дж. Палмер и А. Л. Агер. 1992. Обзор практических методов диагностики малярии. Анна. Троп. Мед. Паразитол. 92 : 419–433. [PubMed] [Google Scholar]42. Маклер, М. Т., Дж. М. Рис, Дж. А. Уильямс, Дж. Э. Бэнкрофт, Р. К. Пайпер, Б. Л. Гиббинс и Д. Дж. Хинрихс. 1993. Лактатдегидрогеназа паразита как тест на чувствительность к лекарству Plasmodium falciparum . Являюсь. Дж. Троп. Мед. Гиг. 48 : 739–741. [PubMed] [Google Scholar]43. Маклер, М. Т. и Д. Дж. Хинрихс. 1993. Измерение активности лактатдегидрогеназы Plasmodium falciparum как оценка паразитемии. Являюсь. Дж. Троп. Мед.Гиг. 48 : 205–210. [PubMed] [Google Scholar]44. Маклер, М. Т., Р. К. Пайпер и В. Милхаус. 1998. Лактатдегидрогеназа и диагностика малярии. Паразитол. Сегодня 14 : 376–377. [PubMed] [Google Scholar]45. Мейер Б., Х. Добели и У. Серта. 1992. Стадийно-специфическая экспрессия изоферментов альдолазы в малярийном паразите грызунов Plasmodium bergei . Мол. Биохим. Паразитол. 52 : 15–27. [PubMed] [Google Scholar]46. Миллер, Р.Л., С. Икрам, Г. Л. Армелагос, Р. Уокер, У. Б. Харер, Си Джей Чиф, Д. Баггетт, М. Кэрриган и С. М. Мане. 1994. Диагностика инфекций Plasmodium falciparum у мумий с использованием быстрого ручного теста ParaSight® F. Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 88 : 31–32. [PubMed] [Google Scholar]47. Миллс, К. Д., Д. Ч. Берджесс, Х. Дж. Тейлор и К. К. Кейн. 1999. Оценка быстрого и недорогого теста с полосками для диагностики малярии Plasmodium falciparum .Бык. WH Org. 77 : 553–559. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]48. Милн, Л. М., П. Л. Чиодини и Д. К. Уорхерст. 1994. Точность обычной лабораторной диагностики малярии в Соединенном Королевстве. Дж. Клин. Патол. 47 : 740–742. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]49. Муди А., А. Хант-Кук, Э. Габбет и П. Чиодини. 2000. Эксплуатационные характеристики тест-полоски OptiMAL® для захвата малярийного антигена для диагностики малярии и мониторинга лечения в Больнице тропических болезней, Лондон.бр. Дж. Гематол. 109 : 891–894. [PubMed] [Google Scholar]50. Oduola, A.M., G.O. Omitowoju, A. Sowunmi, M.T. Makler, C.O. Falade, D.E. Kyle, F.A. Fehintola, O.A. Ogundahunsi, R.C. Piper, B.G. Schuster и WK Milhous. 1997. Plasmodium falciparum : оценка лактатдегидрогеназы при мониторинге терапевтического ответа на стандартные противомалярийные препараты в Нигерии. Эксп. Паразитол. 87 : 283–289. [PubMed] [Google Scholar]51. Палмер, К.J., J.F. Lindo, W.I. Klaskala, J.A. Quesada, R. Kaminsky, M.K. Baum и A.L.Ager. 1998. Оценка теста OptiMAL для экспресс-диагностики малярии Plasmodium vivax и Plasmodium falciparum . Дж. Клин. микробиол. 36 : 203–206. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]52. Palmer, C.J., L. Validum, J. Lindo, A. Campa, C. Validum, M. Makler, R.R. Cuadrado и A. Ager. 1999. Полевые испытания экспресс-теста на малярию OptiMAL® во время противомалярийной терапии в Гайане.Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 93 : 517–518. [PubMed] [Google Scholar]53. Пейрон, Ф. Г., Дж. П. Мартет и А. Виглер. 1994. Тест-полоска для захвата антигена для выявления малярии. Ланцет i : 1502–1503. [PubMed] [Google Scholar]54. Пьерони П., К. Д. Миллс, К. Орт, М. А. Харрингтон и К. К. Кейн. 1998. Сравнение теста ParaSight® F и ICT® на малярию Pf с полимеразной цепной реакцией для диагностики малярии Plasmodium falciparum у путешественников.Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 92 : 166–169. [PubMed] [Google Scholar]55. Пайпер Р., Дж. Лебрас, Л. Вентворт, А. Хант Кук, С. Хауз, П. Чиодини и М. Маклер. 1999. Диагностический анализ на малярию с использованием Plasmodium лактатдегидрогеназы (pLDH). Являюсь. Дж. Троп. Мед. Гиг. 60 : 109–118. [PubMed] [Google Scholar]56. Пайпер, Р. К., Д. Л. Вандерджагт, Дж. Дж. Холбрук и М. Маклер. 1996. Лактатдегидрогеназа малярии: цель для диагностики и разработки лекарств.Анна. Троп. Мед. Паразитол. 90 : 433. [Google Scholar]57. Premji, Z., J. N. Minjas и C. J. Schiff. 1994. Лабораторная диагностика малярии сельскими медиками с использованием экспресс-теста ParaSight® F. Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 88 : 418. [PubMed] [Google Scholar]58. Китана, М., Р. Пайпер, Х. Болинг, М. Маклер, Г. Э. Шерман, Э. Фернандес и С. Мартин. 1998. Диагностика малярии с помощью тест-полоски в гондурасской популяции с коэндемичными Plasmodium falciparum и vivax .Являюсь. Дж. Троп. Мед. Гиг. 59 : 868–871. [PubMed] [Google Scholar]59. Рок, Э. П., К. Марш, С. Дж. Сол, Т. Э. Веллемс, Д. У. Тейлор, У. Л. Малой и Р. Дж. Ховард. 1987. Сравнительный анализ Plasmodium falciparum богатых гистидином белков HRP1, HRP2 и HRP3 в диагностике малярии различного происхождения. Паразитология 95 : 209–227. [PubMed] [Google Scholar] 60. Шифф, С. Дж., З. Премжи и Дж. Н. Минджас. 1993. Экспресс-тест ParaSight® F вручную.Новый диагностический инструмент для инфекции Plasmodium falciparum . Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 87 : 646–648. [PubMed] [Google Scholar]61. Seesod, N., J. Lundeberg, A. Hedrum, L. Asland, A. Holder, S. Thaithong и M. Uhlen. 1993. Иммуномагнитная очистка для облегчения диагностики ДНК Plasmodium falciparum . Дж. Клин. микробиол. 31 : 2715–2719. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]62. Сетхабутр, О., А. Э. Браун, С. Паним, К.К. Каин, К. Вебстер и П. Эчеверриа. 1992. Обнаружение Plasmodium falciparum с помощью полимеразной цепной реакции в полевых исследованиях. Дж. Заразить. Дис. 166 : 145–148. [PubMed] [Google Scholar]63. Сингх Н., М. Валенча и В. П. Шарма. 1997. Диагностика малярии полевыми работниками с помощью иммунохроматографического теста. Транс. Р. Соц. Троп. Мед. Гиг. 91 : 396–397. [PubMed] [Google Scholar]64. Снуноу Г., С. Вириякосол, В. Джарра, С. Тайтонг и К.Н. Браун. 1993. Идентификация четырех видов малярии человека в полевых образцах с помощью полимеразной цепной реакции и обнаружение высокой распространенности смешанных инфекций. Мол. Биохим. Паразитол. 58 : 283–292. [PubMed] [Google Scholar]65. Шринавасан С., А. Х. Муди и П. Л. Чиодини. 2000. Сравнение микроскопии мазка крови, тест-полоски OptiMAL®, родамина 123 и ПЦР для мониторинга противомалярийного лечения. Анна. Троп. Мед. Паразитол. 94 : 227–232.[PubMed] [Google Scholar]66. Tanabe, K. 1983. Окрашивание эритроцитов мышей, инфицированных Plasmodium yoelii , флуоресцентным красителем родамином 123. J. Protozool. 30 (4): 707–710. [PubMed] [Google Scholar]67. Титра, Э., С. Суприанто, М. Дайер, Б. Дж. Карри и Н. М. Ансти. 1999. Полевая оценка иммунохроматографического теста ICT malaria Pf/Pv для выявления Plasmodium falciparum и Plasmodium vivax у пациентов с предполагаемым клиническим диагнозом малярии в восточной Индонезии.Дж. Клин. микробиол. 37 : 2412–2417. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]68. Верле, П., Л. Н. Бинк, Т. Т. Лиу, П. Т. Йен и М. Кусманс. 1996. Тест ParaSight® F для диагностики малярии в гипоэндемичных районах и регионах Вьетнама, подверженных эпидемиям. Троп. Мед. Междунар. Здоровье 1 : 794–796. [PubMed] [Google Scholar]70. Ватая, Ю., М. Араи, Ф. Кубочи, К. Мизулоши, Т. Какутани, Н. Охта и А. Исии. 1993. ДНК-диагностика малярии falciparum с использованием метода двойной ПЦР: полевые испытания на Соломоновых островах.Мол. Биохим. Паразитол. 58 : 65–168. [PubMed] [Google Scholar]71. Ватья Ю., Ф. Кубочи, К. Мидзукоши, Ю. Ойя, К. Ватанабэ, М. Араи, А. Исии и А. Накагам. 1991. ДНК-диагностика малярии falciparum. Симптом нуклеиновых кислот. сер. 25 : 155–156 [PubMed] [Google Scholar]71a. Уитти, С.Дж.М., М. Армстронг и Р.Х. Беренс. 2000. Самостоятельное тестирование на малярию falciparum с карточками для захвата антигена путешественниками с симптомами малярии. Являюсь. Дж. Троп Мед.Гиг. 63 : 295–297. [PubMed] [Google Scholar]72. Вонгсричаналай, К., Н. Чуанак, С. Туляйон, Н. Танусингха, А. Лабунчал, Т. Г. Тимасарн и Д. Г. Хеппнер. 1999. Сравнение экспресс-теста иммунохроматографии в полевых условиях с экспертной микроскопией для обнаружения бесполой паразитемии Plasmodium falciparum в Таиланде. Acta Trop. 73 : 263–273. [PubMed] [Google Scholar]73. Вонгсричаналай, К., Дж. Порнсилапатип, В. Намсирипонпун, Х.К. Вебстер, А.Луччини, П. Пансамданг, Х. Уайльд и М. Праситтисук. 1991. Флуоресцентная микроскопия с акридиновым оранжевым и обнаружение малярии в популяциях с низкой плотностью паразитемии. Являюсь. Дж. Троп. Мед. Гиг. 44 : 17–20. [PubMed] [Google Scholar]

74. Всемирная организация здравоохранения. 2000. ВОЗ/MAL/2000.1091. Новые перспективы в диагностике малярии. Всемирная организация здравоохранения, Женева, Швейцария.

Sandbox Payments

Square Sandbox можно использовать для тестирования вызовов Square API.Для некоторых API требуются специальные тестовые значения при создании транзакций в песочнице, особенно при обработке тестовых платежей.

Клиенты платформы Square, такие как приложения SDK для веб-платежей и In-App Payments SDK, принимают платежные карты и возвращают одноразовые зашифрованные платежные токены для отправки в конечные точки платежей Square API для приема платежей. Вы можете не тестировать свой код с реальной платежной картой, тестируя в песочнице.

Песочница не принимает действительные кредитные карты.Вы должны использовать тестовые значения кредитной карты, указанные в следующих разделах.

Протестируйте логику представления карты на стороне клиента в своем приложении SDK для веб-платежей или SDK для платежей в приложениях, используя тестовые номера кредитных карт для создания платежных токенов для использования с платежами Square API и конечными точками карт в файле в песочнице.

Если вам не нужно тестировать логику платежного токена на стороне клиента, используйте тестовые платежные токены, предоставленные в разделе тестирования конечных точек Square, для отправки платежей в песочнице.

Вы можете использовать кредитные карты Sandbox с SDK Web Payments SDK и SDK In-App Payments для ввода номеров карт, которые генерируют платежный токен для тестирования Sandbox.

Значения состояния успеха при предъявлении карты Постоянная ссылкаПолучить ссылку на этот раздел

Песочница поддерживает набор номеров кредитных карт для всех марок карт, поддерживаемых Square, для имитации сценариев платежей на стороне клиента.

Марка Номер CVV
Visa 4111 1111 1111 1111 111
Mastercard 5105 1051 0510 5100 111
Discover 6011 0000 0000 0004 111
Diners Club 3000 000000 0004 111
JCB 3569 9900 1009 5841 111
American Express 3400 000000 00009 1111
China UnionPay 6222 9888 1234 0000 123
Square Подарочная карта 7783 3200 0000 0000

Примечания:

  • Вы можете установить дату истечения срока действия карты в любой будущий месяц и год.

  • Для платежей в долларах США (США), канадских долларах (Канада) или фунтах стерлингов (Великобритания) требуется действительный почтовый индекс.

  • Песочница имитирует использование платежных карт в странах, поддерживаемых Square. В производственной среде бренд карты и поддержка страны могут отличаться. Прежде чем запускать приложение в рабочую среду, просмотрите Поддерживаемые способы оплаты по странам.

Значения состояния успешного банковского перевода ACH Постоянная ссылкаПолучить ссылку на этот раздел

Песочница поддерживает платежи банковским переводом ACH, принимая тестовое имя пользователя user_good и тестовый пароль pass_good .Эти тестовые значения предоставляются Plaid API и могут измениться в будущем. Для получения дополнительной информации см. страницу учетных данных теста Plaid Sandbox.

Значения состояния ошибки Постоянная ссылкаПолучить ссылку на этот раздел

Вы можете воспроизвести определенные состояния ошибок в песочнице, указав специальные значения в SDK для веб-платежей или SDK для платежей в приложениях.

Если вы используете одно из следующих значений, возвращаемый токен платежа генерирует ошибку при обработке конечной точкой CreatePayment.

.
Тестовые значения Желаемое состояние ошибки
CVV: 911 Карта CVV
Postal Code: 9999
Дата истечения срока действия карты неверная
Номер карты: 4000000000000002 Карта отказался номер
PAN: 40000000000010 Карта на файле Auth Auth Auth. токен платежа, возвращаемый SDK веб-платежей.Чтобы протестировать различные сценарии SCA, используйте карточки, представленные в следующей таблице.

Используйте функцию Payments.verifyBuyer для вызовов SCA с предъявлением карты и картой в файле (CoF) со следующими тестовыми значениями.

Марка

Цифры

CVV Вызова Тип Проверочный код
Visa 4800 0000 0000 0004 111 Нет Вызова N / A
Mastercard 5222 2200 0000 0005 111 Нет вызов N / A
Discover EU 6011 0000 0020 1016 111 Нет вызов 123456
Visa EU 4310 0000 0020 1019 111 режимное с проверочный код 123456
Mastercard 5248 4800 0021 0026 111 режимное с проверочный код 123456
Mastercard EU 5500 0000 0020 1016 111 Модальный режим с проверочным кодом 1 23456
American Express EU 3700 000002 01014 1111 режимных с проверочный код 123456
Mastercard 5333 3300 0000 0008 111 режимных с несколькими Вопросами верификации Задачей 1 : Thomason
Challenge 2: выберите Сент-Луис и Даллас
Challenge 3.Smith
Visa 4811 1100 0000 0008 111 Нет проблем с неудачной проверкой N/A

Поток SCA Требуется поток SCA для предоставления мобильного телефона. . При тестировании в Песочнице используйте проверочный код для имитации кода, отправленного с помощью SMS.

  • С картами, у которых нет проблем, карта завершает процесс SCA без необходимости в окне проверки.

  • Пакет SDK для веб-платежей создает маркер проверки для каждого вызова verifyBuyer (за исключением случаев, когда покупатель отменяет вызов SCA). Продавец должен передать токен проверки, когда он используется для создания платежа или хранения платежной карты. Продавец должен быть готов к ситуациям, когда Square или банк-эмитент могут отклонить платеж или отказать в хранении платежной карты. Например, банк-эмитент определяет, что платежный запрос является подозрительным, и помечает его как транзакцию мошенничества, или банк блокирует счет покупателя.

  • В песочнице verifyBuyer создает вызов покупателя во всех регионах, как обязательных, так и иных. В производственной среде вы видите вызов покупателя только для обязательных регионов.

Поток SCA и эти тестовые значения не поддерживаются в устаревшей песочнице.

Протестируйте логику платежей, использующую конечную точку CreatePayment для принятия платежа или конечную точку CreateCard для сохранения карты клиента в файле.

Если вы используете Square Payments API для создания платежей в песочнице, вы можете использовать один из тестовых платежных токенов песочницы в качестве source_id в платежном запросе.

Платежные токены для платежей, связанных с картой Постоянная ссылкаПолучить ссылку на этот раздел

Используйте значения в следующей таблице с вызовами конечной точки CreatePayment, которым удалось создать платеж.

поле Оплата: source_id Способ оплаты
cnon: карта-нонс-ок Card
ccof: клиент-карты ID-ок Карта в файле
CNON: подарочная карта-подарочная карта Квадратная подарочная карта
CCOF: SCA-CARD-ID-REQUIRES-VERICATION (SCA).

Кроме того, если вы хотите протестировать ошибки в конечной точке Square CreatePayment, вы можете используйте следующие тестовые значения.

значение source_id Отображение ошибок
Присутствует карта. cnon:card-nonce-rejected-cvv Ошибка CVV
Наличие карты. cnon:card-nonce-rejected-postalcode
Карта в файле. ccof:customer-card-id-rejected-postalcode
Неверный почтовый индекс
Наличие карты. cnon:card-nonce-rejected-expiration
Карта в файле. ccof:customer-card-id-rejected-expiration
Неправильный срок действия
Наличие карты. cnon:card-nonce-declined
Карта в файле. ccof:customer-card-id-declined
Карта отклонена
Карта присутствует. cnon:card-nonce-already-used Платежный токен карты уже использован
Наличие карты. cnon:gift-card-nonce-insufficient-funds Недостаточно средств на подарочной карте
Наличие карты. cnon:gift-card-nonce-insufficient-permission Подарочная карта без разрешений

Платежные токены для платежей банковским переводом через ACH Постоянная ссылкаПолучить ссылку на этот раздел

значение source_id отображение ошибки Ожидаемое поведение
bnon: банк-нонс-ок Запрос успешно.
bnon:bank-nonce-failure GENERIC_DECLINE Запрос не выполнен.
bnon:bank-nonce-account-unusable ACCOUNT_UNUSABLE Запрос не выполнен.
bnon:bank-nonce-insufficient-funds INSUFFICIENT_FUNDS Запрос не выполнен.
bnon:bank-nonce-invalid-account INVALID_ACCOUNT Запрос не выполнен.
bnon:bank-nonce-buyer-refused-payment BUYER_REFUSED_PAYMENT Запрос не выполнен.

Обратите внимание на следующее:

  • Полученный платеж имеет начальный статус ОЖИДАНИЕ, который обновляется на ЗАВЕРШЕН через 1 минуту.

  • В случае неудачных запросов результирующий платеж имеет начальный статус PENDING, который обновляется на FAILED через 1 минуту.

Платежные токены для платежей Afterpay Постоянная ссылкаПолучить ссылку на этот раздел

значение source_id отображение ошибки Ожидаемое поведение
wnon: afterpay или-clearpay-ок Запрос успешно.
wnon:afterpay-or-clearpay-declined GENERIC_DECLINE Запрос не выполнен.

Платежные токены для тестирования обновлений платежных запросов Постоянная ссылкаПолучить ссылку на этот раздел

Вы также можете использовать следующие тестовые значения для создания платежей с помощью CreatePayment . Преимущество использования этих значений токенов заключается в том, что обновления этих платежей с использованием UpdatePayment всегда возвращают следующие предсказуемые результаты.

значение source_id

отображение ошибки Ожидаемое поведение
cnon: карта-нонс-ок Запрос успешно.
cnon:card-edit-not-allowed BAD_REQUEST Платеж, созданный с использованием этого токена, не имеет возможностей. В результате любой запрос UpdatePayment на обновление суммы или чаевых завершается ошибкой.
cnon: карта-редактирование-вниз только BAD_REQUEST Оплата , созданный с помощью этого маркера имеет EDIT_AMOUNT_DOWN и EDIT_TIP_AMOUNT_DOWN возможности.Запрос UpdatePayment , уменьшающий эти суммы, выполнен успешно. Однако любая попытка увеличить эти суммы терпит неудачу.
cnon:card-edit-tip-failure AMOUNT_TOO_HIGH UpdatePayment всегда возвращает слишком большую ошибку.
cnon:card-edit-failure AMOUNT_TOO_HIGH UpdatePayment всегда возвращает слишком большую сумму.

В песочнице следующие суммы платежей в запросе CreatePayment генерируют объект Payment с Risk_evaluation , определяющим конкретные уровни риска.

Charge сумма Уровень риска
2222 СРЕДНЯЯ
3333 ВЫСОКИЕ
другие значения NORMAL

Быстрые диагностические тесты (БДТ)

Быстрые диагностические тесты (БДТ) — это диагностические тесты, предназначенные для использования в местах оказания медицинской помощи (POC), и их можно адаптировать для использования в условиях ограниченных ресурсов.БДТ недорог, прост в эксплуатации и считывании, чувствителен, специфичен, стабилен при высоких температурах и работает в течение короткого периода времени. ДЭТ уже используются для лечения нескольких забытых болезней.

Обзор

Экспресс-диагностические тесты (ДЭТ) являются типом диагностики по месту оказания медицинской помощи, что означает, что эти тесты предназначены для удобного и немедленного предоставления результатов диагностики пациенту, пока он все еще находится в медицинском учреждении, пункте скрининга или другом месте. медицинская организация. Постановка диагноза на месте оказания медицинской помощи снижает потребность в нескольких посещениях для получения результатов диагностики, тем самым повышая специфичность диагноза и шансы пациента на получение лечения, уменьшая зависимость от предполагаемого лечения и снижая риск того, что пациент заболеет раньше. ставится правильный диагноз.Экспресс-тесты используются в различных местах оказания медицинской помощи — от домов до клиник первичной медико-санитарной помощи или отделений неотложной помощи — и многие из них практически не требуют лабораторного оборудования или медицинской подготовки.

ДЭТ особенно важны в условиях ограниченных ресурсов, где:

  • Суровые условия окружающей среды в сочетании с ограниченным доступом к электричеству и охлаждению исключают использование чувствительного оборудования
  • Отсутствуют технологии, оборудование и обучение, необходимые для более сложных лабораторных тестов
  • Многие пациенты не могут легко добраться до клиники для наблюдения за результатами, что занимает много времени

ДЭТ могут быть особенно полезны при работе с образцами пациентов, которые могут быть собраны медицинским персоналом с минимальной подготовкой, например, работниками общественного здравоохранения. 1  Жидкости организма, которые можно собрать неинвазивно, такие как мазки из носа, моча, слюна и слезы, предпочтительнее, поскольку их легче всего собрать при минимальной подготовке. Однако методы сбора капиллярной крови, такие как используемые для ДЭТ на малярию, демонстрируют, что инновации в сборе образцов могут быть использованы для повышения полезности ДЭТ в условиях ограниченных ресурсов.

Вместо одного конкретного типа технологии, быстрые диагностические тесты могут быть построены на различных платформах, каждая из которых имеет свои преимущества и ограничения. 2  Подавляющее большинство ДЭТ, используемых сегодня для лечения забытых заболеваний, основаны на технологии иммунологического анализа из-за ее относительной простоты. Эти тесты обычно включают взаимодействие фиксированного реагента либо целевого антигена, либо антитела, связанного с каким-либо типом видимого детектора, который затем реагирует с образцом пациента. Другие типы технологий, такие как амплификация нуклеиновых кислот, могут быть слишком дорогими и требовать слишком много передовых технологий, чтобы их можно было применять в качестве тестов по месту оказания медицинской помощи.

Быстрые диагностические тесты имеют особую ценность как эпидемиологические инструменты, помимо использования в качестве диагностики. Они позволяют проводить быстрый скрининг потенциально пораженной популяции и могут использоваться, как и в случае с лимфатическим филяриатозом, в качестве теста на излечение, чтобы определить, когда массовое введение лекарств было успешным. ДЭТ менее необходимы для заболеваний, которые обычно точно диагностируются синдромально, но могут предотвратить чрезмерное назначение антибиотиков, если используются для дифференциальной диагностики лихорадки или диареи, соответственно. 2

Общие платформы RDT

Существует несколько различных платформ, обычно используемых для создания быстрых диагностических тестов. Относительная полезность распространенных платформ RDT представлена ​​ниже.

Тесты с боковым потоком — это самый простой тип БДТ, требующий лишь минимального знакомства с тестом и не требующий никакого оборудования для выполнения, поскольку все реагенты и детекторы включены в тест-полоску. В тесте с боковым потоком образец помещается в лунку для образца и мигрирует через зону, где иммобилизованы антиген или антитело.Результаты считываются по прошествии определенного времени. Другой тип RDT, проточный тест, дает результаты даже быстрее, чем тесты с латеральным потоком, но требует дополнительной стадии промывки и буферизации, что может ограничить его портативность и стабильность.

Реакция на агглютинацию проводится очень просто путем наблюдения за связыванием частиц-носителей и целевых аналитов в видимые комки, наблюдаемые либо в микроскоп, либо невооруженным глазом. Однако если связывание частиц слабое, результаты теста могут быть неубедительными.

ДЭТ формата «полоска для измерения» (с сайтами связывания для тестирования на несколько антигенов) работают, помещая полоску для измерения в образец. Затем полоску промывают и инкубируют для предотвращения неспецифического связывания анализируемого вещества. Эти дополнительные шаги могут ограничить их использование в пунктах оказания медицинской помощи с ограниченными ресурсами.

Микрофлюидика, или «лаборатория на чипе», является новой областью быстрого развития диагностики. При использовании электрохимических датчиков эти тесты будут включать все детекторы и реагенты в одной переносной кассете.Дополнительные сведения см. в отчете о карте инноваций в области диагностики. Ограничения и преимущества каждого из этих типов тестов приведены в таблице ниже. Дополнительные сведения о механизмах этих тестов см. на веб-сайте PATH RDT Info. 3

Сильные и слабые стороны RDT и общих платформ RDT

3

Общие преимущества RDT включают простоту использования, минимальные требования к обучению, быстрые результаты и ограниченную потребность в инструментах/инфраструктуре.Общие недостатки ДЭТ, включая их субъективную интерпретацию показаний, низкую пропускную способность, часто ограниченную чувствительность по сравнению с лабораторными или эталонными тестами и необходимость в механизмах контроля качества. В следующей таблице приведены сильные и слабые стороны нескольких платформ RDT:

Тест Сильные стороны Слабые стороны Примеры
Латеральные тесты (иммунохроматографические стрип-тесты) Быстрый (5-15 мин)
Может быть адаптирован для нескольких типов образцов
Самый простой в использовании
Результаты качественные
Менее чувствительны, чем ELISA
ДЭТ на малярию, домашние тесты на беременность
Реакция агглютинации Одношаговый
Низкая стоимость теста
Быстрые результаты
Низкая чувствительность и неоднозначные результаты при слабых реакциях
Некоторые тесты требуют обучения и/или микроскопа для чтения результатов
Некоторые перекрестные реакции могут вызывать проблемы с чувствительностью
Реакция латекс-агглютинации ВИЧ, лейшманиоз DAT
Проточный Очень быстро (3-5 мин) Требует большей подготовки, чем латеральный поток
Менее чувствителен при обнаружении антигена по сравнению с латеральным потоком
Э.coli  обнаружение
Твердофазный анализ («полосками») Одна полоска может тестировать несколько параметров Требуется несколько промежуточных шагов, некоторое обучение «Расчесочный» тест на ВИЧ
Микрожидкостные чипы, иммуносенсоры, «лаборатории на чипе» Rapid
Не требует манипуляций
Потенциально непомерно дорого На данный момент в значительной степени гипотетически

Существующие продукты

ДЭТ как средства диагностики не забытых тропических болезней

Быстрые диагностические тесты имеются в продаже для выявления многих заболеваний и состояний, не остающихся без внимания, включая беременность, уровень сахара в крови у пациентов с диабетом и острый фарингит.Простота этих анализов часто позволяет использовать их в домашних условиях или минимально обученными медицинскими работниками как в развитых, так и в развивающихся странах. В Соединенных Штатах использование врачами быстрых диагностических тестов ограничено, поскольку текущие схемы возмещения расходов Medicaid/Medicare отдают предпочтение использованию централизованных лабораторий для диагностики.

ДЭТ как средство диагностики забытых тропических болезней

Одной из конкретных проблем, связанных с производством и внедрением ДЭТ в условиях ограниченных ресурсов, является отсутствие процесса оценки для определения их реальной эффективности в полевых условиях.Например, недавно ВОЗ опубликовала программное заявление, в котором рекомендовала не использовать быстрые серологические тесты на туберкулез из-за недостаточной чувствительности и специфичности. 4  WHO-TDR и FIND теперь имеют программы тестирования партий ДЭТ на забытые заболевания, такие как малярия и ВИЧ, для улучшения стандартов и рекомендаций по использованию ДЭТ в полевых условиях. 5-7

Чтобы решить постоянную проблему обеспечения качества экспресс-тестов, ВОЗ в настоящее время проводит независимую оценку ДЭТ для нескольких заболеваний, включая ВИЧ и малярию, чтобы оценить их для предварительной квалификации.Как и в случае с предварительной квалификацией для лекарств или вакцин, это обозначение является методом ВОЗ проверки качества конкретных диагностических тестов и производителей для тех, кто находится в странах, где нет строгих и строгих процессов утверждения диагностических средств.

.
НТД Тест Примечания
ВИЧ Многие типы Существуют тесты на агглютинацию, твердофазные тесты и тесты с латеральным потоком на ВИЧ.
Малярия Более 120 ДЭТ, имеющихся в продаже более чем от 60 компаний В основном качественный — менее полезен в эндемичных районах.
Трудность дифференциации подтипов малярии.
HRPII продолжает циркулировать в крови в течение нескольких недель после излечения, поэтому возможны ложноположительные результаты
Лейшманиоз Прямая реакция агглютинации является полевым золотым стандартом Использование фиксированного антигена в этом тесте означает, что «тест на излечение» от лейшманиоза все еще отсутствует
Онкохеркоз Карточный экспресс-иммунохроматографический тест Ov-16 Пока не доступен в полевых условиях, только в лаборатории
Тест на обнаружение антител, поэтому невозможно определить, активна ли инфекция
Шистосомоз Анализ мочи на основе моноклональных антител Доступно только для S.гематобий
Лимфатический филяриатоз Циркулирующий филяриатозный антиген (CFA) Иммунохроматографический карточный тест Обнаруживает только W. bancrofti
Потенциально чрезмерно дорогой

Проверка личности федеральных служащих и подрядчиков

Тестовые карточки NIST для проверки личности

Тестовая информация PKI  | Образцы сообщений  | Тестовые карточки версии 1  | Список адресов электронной почты


Чтобы облегчить разработку приложений и промежуточного программного обеспечения, поддерживающих карту проверки личности (PIV), Национальный институт стандартов и технологий (NIST) разработал набор тестовых карт PIV, которые можно приобрести по номеру . Специальная база данных NIST .Обзор тестовых карт PIV представлен в NIST 8347, NIST Test Personal Identity Verification (PIV) Cards Version 2 . NISTIR 8347 также содержит технические сведения о содержимом каждой из тестовых карточек в наборе.

Приобретение тестовых карт PIV:

 

Другие вопросы по тестовым картам PIV:

Отправить электронное письмо Дэвиду Куперу

 

Проверка информации PKI

Все сертификаты на тестовых картах PIV были выпущены тестовой инфраструктурой открытого ключа (PKI) , которая была создана для поддержки тестовых карт.PKI состоит из двухуровневой иерархии. Чтобы иметь возможность проверять сертификаты на тестовых картах, необходимо будет установить корневой центр сертификации (ЦС) из PKI в качестве якоря доверия в программном обеспечении, которое будет проверять сертификаты. Загрузите самозаверяющий сертификат ЦС для корневого ЦС, который можно использовать для установки корневого ЦС в качестве якоря доверия

.

Все сертификаты в тестовой PKI содержат расширения authorInfoAccess и subjectInfoAccess , где это применимо, с URI, указывающими на промежуточные сертификаты ЦС, необходимые для создания путей сертификации для проверки сертификатов конечных объектов на картах PIV.Однако не все программы способны использовать информацию в этих расширениях для автоматического получения необходимых сертификатов. Чтобы проверить тестовые сертификаты с помощью такого программного обеспечения, необходимо будет вручную установить промежуточные сертификаты ЦС в дополнение к сертификату якоря доверия. Загрузите все промежуточные сертификаты CA в тестовой PKI (ZIP-файл).

Каждый ЦС в тестовой PKI выдает списков отзыва сертификатов (CRL) , которые доступны через HTTP, и каждый сертификат, выданный тестовой PKI, включает расширение cRLDistributionPoints, которое включает URI HTTP, указывающий на соответствующий CRL для тот сертификат.Для некоторых ЦС CRL также доступны через LDAP.

Тестовая PKI также включает ответчик Online Certificate Status Protocol (OCSP) , который предоставляет информацию о статусе отзыва для всех сертификатов конечного объекта, выпущенных тестовой PKI. Каждый из сертификатов конечного объекта включает HTTP URI в своем расширении authorInfoAccess, который указывает на этот ответчик OCSP. Ответчик OCSP предоставляет только предварительно подготовленные ответы, которые создаются одновременно с созданием CRL.

Образцы зашифрованных сообщений электронной почты

Чтобы упростить тестирование ключей управления ключами на картах, загрузите набор примеров зашифрованных сообщений электронной почты (ZIP-файл). ZIP-файл включает один образец зашифрованного сообщения электронной почты для каждого ключа управления ключами в наборе тестовых карточек. Имя файла для каждого зашифрованного сообщения электронной почты включает номер карты и указание того, какой ключ управления ключами с этой карты использовался для шифрования сообщения. Например, «enc07.eml» был зашифрован с использованием текущего ключа управления ключами из тестовой карты PIV 7, тогда как «enc08rH.eml» был зашифрован с использованием устаревшего сертификата управления ключами H из тестовой карты PIV 8 (поскольку сертификат помечен в NISTIR 8347).

Тестовые карты версии 1

Информация о первой версии тестовых карт PIV содержится в NISTIR 7870 , NIST Test Personal Identity Verification (PIV) Cards . Технические характеристики тестовых карточек для проверки личности (PIV) содержат технические сведения о содержимом каждой из тестовых карточек в первой версии набора.

Загрузки для версии 1 тестовых карт PIV все еще доступны:


Список рассылки

Сколько пользователей нужно протестировать

Одной из самых больших проблем при проектировании веб-сайтов и интрасетей является создание информационной архитектуры : что куда? Классической ошибкой является структурирование информационного пространства на основе того, как вы просматриваете содержимое, что часто приводит к различным дочерним сайтам для каждого из отделов вашей компании или поставщиков информации.

Вместо того, чтобы просто зеркально отображать организационную структуру, вы можете повысить удобство использования, создав информационную архитектуру, которая отражает то, как пользователи просматривают контент. В каждом из наших исследований интрасети мы обнаружили, что некоторые из самых больших приростов производительности происходят, когда компании реструктурируют свою интрасеть, чтобы отразить рабочий процесс сотрудников . А в электронной коммерции продажи увеличиваются, когда товары появляются в категориях, в которых пользователи ожидают их найти.

Все очень хорошо, но как узнать взгляд пользователей на информационное пространство и куда, по их мнению, должен быть помещен каждый элемент? Для исследования этого типа ментальной модели основным методом является сортировка карт:

  1. Напишите название (и, возможно, краткое описание) каждого из основных предметов на каталожной карточке.Да, старые добрые бумажные открытки. (Заботясь о том, чтобы не использовать термины, предвзято относящиеся к пользователям.)
  2. Перетасуйте карты и отдайте колоду пользователю. (Применяются стандартные рекомендации по набору участников тестирования: они должны быть репрезентативными пользователями и т. д.)
  3. Попросите каждого пользователя рассортировать карточки по стопкам, поместив элементы, которые принадлежат друг другу, в одну стопку. Пользователи могут создавать столько стопок, сколько захотят; одни кучки могут быть большими, другие маленькими.
  4. Необязательные дополнительные шаги включают в себя просьбу пользователей организовать полученные стопки в более крупные группы и назвать разные группы и стопки.Последний шаг может дать вам идеи для слов и синонимов, которые можно использовать для навигационных меток, ссылок, заголовков и поисковой оптимизации.

Поскольку при сортировке карточек не используются технологии, эта фотография сортировки карточек 1995 года выглядит так же, как сегодняшняя.

Исследование

Fidelity Investments имеет одну из лучших в мире команд по юзабилити, возглавляемую доктором Томасом С. Таллисом, старшим вице-президентом по дизайну интерфейсов. Таллис и соавтор Ларри Вуд недавно сообщили о результатах исследования кривой компромисса для тестирования различного количества пользователей в упражнении по сортировке карточек.

Сначала они протестировали 168 пользователей и получили очень хорошие результаты. Затем они смоделировали результаты проведения исследований по сортировке карточек с небольшими группами пользователей, проанализировав случайные подмножества общего набора данных. Например, чтобы посмотреть, что даст тест 20 пользователей, они случайным образом выбрали 20 пользователей из общего набора 168 и проанализировали данные сортировки карточек только этой подгруппы. Выбрав множество таких выборок, можно было оценить средние результаты тестирования разного количества пользователей.

Основными количественными данными исследования сортировки карточек является набор из показателей сходства , которые измеряют сходство оценок пользователей для различных пар элементов. Если бы все пользователи сложили по две карточки в одну стопку, то два предмета, представленные карточками, имели бы 100% сходство. Если половина пользователей положит две карты вместе, а половина разложит их по разным стопкам, эти два предмета будут иметь 50% сходства.

Мы можем оценить результаты небольшого исследования сортировки карточек, спросив, насколько хорошо его показатели сходства коррелируют с показателями, полученными в результате тестирования большой группы пользователей.(Напоминание: корреляции варьируются от -1 до +1. Корреляция 1 показывает, что два набора данных идеально выровнены; 0 указывает на отсутствие связи; а отрицательные корреляции указывают на наборы данных, которые противоположны друг другу.)

Сколько пользователей?

Для большинства исследований юзабилити я рекомендую протестировать 5 пользователей, так как этих данных достаточно, чтобы научить вас большей части того, что вы когда-либо узнаете в ходе теста. Однако для сортировки карт корреляция между результатами 5 пользователей и окончательными результатами составляет всего 0,75.Этого недостаточно.

Вы должны протестировать 15 пользователей, чтобы достичь корреляции 0,90, что является более удобным местом для остановки. После 15 пользователей наступает убывающая отдача, и корреляции увеличиваются очень незначительно: тестирование 30 человек дает корреляцию 0,95 — безусловно, лучше, но обычно не стоит вдвое больше денег. Вряд ли есть какие-либо улучшения от выхода за пределы 30 пользователей: вам нужно протестировать 60 человек, чтобы достичь 0,98, и это определенно расточительно.

Таллис и Вуд рекомендуют протестировать 20–30 пользователей на сортировку карточек.Основываясь на их данных, я рекомендую протестировать 15 пользователей .

Почему я рекомендую тестировать меньшее количество пользователей? Я думаю, что корреляции 0,90 (для 15 пользователей) или, возможно, 0,93 (для 20) достаточно для большинства практических целей. Я, конечно, могу увидеть тестирование 30 человек и достижение 0,95, если у вас есть большой, хорошо финансируемый проект с большими деньгами на кону (скажем, интранет на 100 000 сотрудников или сайт электронной коммерции с доходом в полмиллиарда долларов). Но у большинства проектов очень ограниченные ресурсы для исследования пользователей; оставшихся 15 пользователей лучше «потратить» на 3 качественных юзабилити-теста разных итераций дизайна.

Позвольте пользователям информировать о вашем дизайне

Я не рекомендую проектировать информационную архитектуру, основанную исключительно на количественных показателях сходства сортировки карточек . При принятии решения о том, что и куда нужно, вы должны полагаться не меньше на качественные данные, которые вы получаете в ходе сеансов тестирования. Большая часть ценности сортировки карточек заключается в том, чтобы выслушивать комментарии пользователей, когда они сортируют карточки: знание того, почему люди складывают определенные карточки вместе, дает более глубокое понимание их ментальных моделей, чем простой факт того, что они сортировали карточки в одну и ту же куча.

Зачем больше пользователей для сортировки карт?

Мы знаем, что для большинства исследований юзабилити достаточно 5 пользователей, так почему же нам нужно в три раза больше участников, чтобы достичь того же уровня понимания при сортировке карточек? Потому что методы отличаются двумя ключевыми моментами:

  • Пользовательское тестирование — это метод оценки : у нас уже есть дизайн, и мы пытаемся выяснить, соответствует ли он природе человека и потребностям пользователя. Хотя люди существенно различаются по своим способностям (знание предметной области, интеллект и навыки работы с компьютером), если определенный элемент дизайна вызывает трудности, мы увидим это после тестирования нескольких пользователей.Пользователь низкого уровня может столкнуться с более серьезными трудностями, чем пользователь высокого уровня, но масштабы трудностей не имеют значения, если только вы не проводите исследование измерений (которое требует большего числа пользователей). Все, что вам нужно знать, это то, что элемент дизайна не работает для человека и его следует изменить.
  • Сортировка карточек — это генеративный метод : у нас еще нет дизайна, и наша цель — выяснить, что люди думают по определенным вопросам. Ментальные модели разных людей и словарь, который они используют для описания одних и тех же понятий, сильно различаются.Мы должны собрать данные от достаточного количества пользователей, прежде чем мы сможем получить стабильную картину предпочтительной структуры пользователей и определить, как учесть различия между пользователями.

Если у вас есть веб-сайт или интрасеть, тестирование нескольких пользователей покажет вам, есть ли у них проблемы с информационной архитектурой. Чтобы создать новую структуру с нуля, вы должны выбрать больше людей.

К счастью, вы можете комбинировать два метода. : Во-первых, используйте генеративные исследования, чтобы определить направление вашего дизайна.Во-вторых, набросайте проект, желательно с использованием бумажного прототипа, и проведите оценочные исследования для уточнения дизайна. Поскольку оценка юзабилити выполняется быстро и дешево, вы можете позволить себе несколько раундов; они также обеспечивают гарантию качества ваших первоначальных генеративных результатов. Вот почему вы не должны тратить ресурсы, выжимая последние 0,02 точки корреляции из ваших карточек. Вы обнаружите любые небольшие ошибки в последующем пользовательском тестировании, что будет намного дешевле, чем удвоение или утроение размера ваших исследований по сортировке карточек.

Изучение слабых сторон

Исследование Fidelity имеет два очевидных недостатка:

  • Это только одно исследование. Всегда лучше иметь данные от нескольких компаний.
  • Анализ был чисто количественным, с упором на статистический анализ оценок сходства и игнорированием комментариев пользователей и других качественных данных.

Эти две слабости не фатальны. Я рассматриваю это как новаторское исследование и большой вклад в наши знания о веб-юзабилити.Но из-за недостатков исследования было бы полезно, если бы кто-нибудь продублировал его с другими информационными пространствами, а также проанализировал качественные данные вместе с числовыми оценками. Звучит как хороший дипломный проект для аспиранта, который хочет исследовать что-то с реальным влиянием (подсказка, подсказка).

Несмотря на то, что дополнительные данные были бы утешительны, я уверен в выводах исследования Fidelity, поскольку они совпадают с моими собственными наблюдениями, полученными в ходе многочисленных карточных исследований за многие годы.Я всегда говорил, что необходимо тестировать больше пользователей для сортировки карточек, чем для традиционных исследований юзабилити. И я обычно рекомендовал около 15 пользователей, хотя у нас также были хорошие результаты всего с 12, когда бюджет был ограничен или пользователей было особенно трудно привлечь.

Существует множество способов, при которых количественные исследования могут пойти не так и ввести вас в заблуждение. Таким образом, если вы видите одно количественное исследование, которое противоречит всему, что известно из качественных исследований, благоразумно игнорировать новое исследование и предположить, что оно, вероятно, является фиктивным.Но когда количественное исследование подтверждает то, что уже известно, оно, вероятно, будет правильным, и вы можете использовать новые цифры в качестве достойных оценок, даже если они основаны на меньшем количестве данных, чем вам хотелось бы в идеале.

Таким образом, в настоящее время рекомендуется протестировать 15 пользователей на сортировку карт в большинстве проектов и 30 пользователей в крупных проектах с щедрым финансированием.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.